X-α-Gal（α-半乳糖苷酶顯色底物/酵母雙雜交檢測）

— — 酵母雙雜交檢測系統(tǒng)/蛋白-蛋白相互作用分析

基本描述：

X-α-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷，CAS：107021-38-5），一種用來檢測α-半乳糖苷酶（也稱為蜜二糖酶，α-D-半乳糖苷半乳糖水解酶，EC 3.2.1.22）活性的顯色底物。X-α-Gal的使用，避開雙雜交分析中β-半乳糖苷酶溶液制備和濾膜提升實驗（filter-lift assay）的繁瑣操作，只需直接添加在培養(yǎng)基上，通過藍色沉淀的生成與否，即可用來檢測雙雜交相互作用。X-α-Gal可用來區(qū)分腸桿菌科內的不同物種以及劃分乳酸菌和雙歧桿菌。組織學研究中，X-α-Gal還可借助光學顯微鏡來檢測組織的α-半乳糖苷酶活性。

利用α-半乳糖苷酶水解二糖-蜜二糖作為碳源，酵母菌得以正常生長或進行發(fā)酵。釀酒酵母菌內，該酶由幾種GAL基因調控的MEL1基因所編碼。一旦GAL4激活，α-半乳糖苷酶分泌，之后水解培養(yǎng)基上的X-α-Gal，使得菌落產(chǎn)生藍斑。酵母雙雜交研究用的工程菌包括AH109，PJ69-2A，Y190和Y187。

X-α-Gal優(yōu)勢：

避開雙雜交分析中β-半乳糖苷酶溶液制備和濾膜提升實驗（filter-lift assay）的繁瑣操作，只需直接添加在培養(yǎng)基上，通過藍色沉淀的生成與否，即可用來檢測雙雜交相互作用。

X-α-Gal與酵母雙雜交系統(tǒng)：

酵母雙雜交篩選是體內用來檢測蛋白-蛋白相互作用的一種遺傳分析實驗，此方法由Prof. Stan Fields及合作者開發(fā)用來調查兩個已知蛋白的相互作用，另一個重要應用是從文庫內篩選并鑒定某一特定蛋白的未知結合蛋白。陽性克隆也就是那些能夠激活報告基因轉錄子，使得營養(yǎng)缺陷型酵母雙雜交菌株在營養(yǎng)缺陷選擇性培養(yǎng)基上生長的菌落。大多數(shù)雙雜交方法使用大腸桿菌的LacZ基因作為第二個報告基因，通常要使用非常耗時的filter-lift assay來鑒定能在第二種選擇性平板上生長的菌落。而替換使用的X-α-Gal，可直接在營養(yǎng)缺陷性的選擇培養(yǎng)基上來檢測基于GAL4-轉錄子的雙雜交作用。

基本特性：

1. CAS NO：107021-38-5
2. 化學名：5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-α-D-galactopyranoside 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷；X-α-D-Galactoside X-α-D-半乳糖苷；
3. 分子式：C₁₄H₁₅BrClNO₆
4. 分子量：408.64g/mol 
5. 純度：≥98%（TLC）
6. 外觀：白色或近白色結晶粉末