Aureobasidin A (AbA) 金擔(dān)子素A/短梗霉素A
——Clontech/Takara 酵母菌/真菌轉(zhuǎn)化實驗選擇性抗生素/酵母單雜交/雙雜交研究
搜索關(guān)鍵詞：
選擇性抗生素；酵母菌轉(zhuǎn)化系統(tǒng)【釀酒酵母、粟酒裂殖酵母、念珠菌】；真菌轉(zhuǎn)化系統(tǒng)【構(gòu)巢曲霉、黑曲霉】；酵母單雜交/雙雜交；AUR1基因；AURA基因；IPAC合成酶；AUR1-C突變基因；
基本描述：
金擔(dān)子素A（Aureobasidin A，AbA），也稱為短梗霉素A，一種來源于絲狀真菌Aureobasidium pullulans No. R106的環(huán)酯肽類抗真菌抗生素，在較低濃度（0.1-0.5μg/ml）下即可對酵母菌產(chǎn)生毒性，對該抗生素敏感的真菌包括：釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）、光滑念珠菌（Candida glabrata）、構(gòu)巢曲霉（Aspergillus nidulans）和黑曲霉（Aspergillus niger.）。金擔(dān)子素AbA通過抑制真菌生長所依賴的肌醇磷脂酰神經(jīng)酰胺合成酶（Inositol phosphorylceramide (IPC) synthase）活性，阻礙神經(jīng)酰胺到肌醇磷脂酰神經(jīng)酰胺的合成，導(dǎo)致鞘脂類物質(zhì)的合成量不足，細胞膜破裂，進而殺死菌株。研究發(fā)現(xiàn)，來自釀酒酵母菌的AUR1和構(gòu)巢曲霉的AURA基因，兩者具有同源性，都能夠編碼IPC合成酶，對這兩種基因的點突變，也都賦予菌株對AbA產(chǎn)生很強的抗性，比如：突變基因AUR1-C。
AbA用作選擇性標(biāo)記的應(yīng)用和優(yōu)勢：
1. 酵母轉(zhuǎn)化研究中，金擔(dān)子素A（AbA）是一種非常有效的選擇性標(biāo)志；
2. 使用上基本不需優(yōu)化條件，且創(chuàng)造極低背景。AbA抗性是酵母雙雜交研究中理想的報告子，兼容于攜帶相應(yīng)抗性的酵母單雜交/雙雜交系統(tǒng)，并提供良好的篩選結(jié)果。
攜帶AbA抗性基因（AUR1-C）的商業(yè)化載體：
1. 大腸桿菌-酵母菌穿梭載體/大腸桿菌-曲霉穿梭載體（shuttle vector）
簡單描述：pAUR載體系統(tǒng)包含六種大腸桿菌-酵母菌穿梭載體，每一種特別改造用于釀酒酵母、粟酒裂殖酵母或者構(gòu)巢曲霉，這些載體都涵蓋一個新型的藥物抗性選擇性標(biāo)志（金擔(dān)子素Aureobasidin A抗性），使得酵母菌或絲狀真菌具有此抗性。
在酵母細胞內(nèi)不會自主復(fù)制，僅通過重組方法整合進入染色體才能保留在細胞內(nèi)。染色體整合和釀酒酵母菌轉(zhuǎn)化用載體。含來自釀酒酵母菌的AbA抗性基因-AUR1-C。大腸桿菌-酵母菌穿梭載體；
含CEN/ARS區(qū)域，在酵母細胞內(nèi)能自主復(fù)制，因此細胞分裂過程能保持穩(wěn)定。含AmpR和URA3基因（尿嘧啶選擇性標(biāo)記），來自釀酒酵母菌的AbA抗性基因-AUR1-C。大腸桿菌-酵母菌穿梭載體；
來自釀酒酵母菌的AbA抗性基因-AUR1-C。蛋白表達載體和來源于pAUR112的大腸桿菌-酵母菌穿梭載體；含用于酵母細胞蛋白表達用的ADH1持續(xù)性啟動子；
Vector for marker removal in S. cerevisiae；大腸桿菌-酵母菌穿梭載體；
含來自粟酒裂殖酵母的AbA抗性基因-aur1R；蛋白表達載體，含粟酒裂殖酵母中發(fā)揮作用的CMV持續(xù)性啟動子；
構(gòu)巢曲霉內(nèi)能夠自主復(fù)制；來自構(gòu)巢曲霉的AbA抗性基因-aurAr以及AMA1區(qū)域（復(fù)制起始區(qū)）和AmpR；大腸桿菌-曲霉穿梭載體；
2. 酵母報告基因載體（yeast reporter vector）
用于單雜交（one-hybrid）實驗的酵母報告載體，可用來鑒定和分類DNA結(jié)合蛋白。特別設(shè)計兼容于Matchmaker Gold 酵母單雜交篩選系統(tǒng)，順式作用元件（靶向序列）可插入MCS用作誘餌以篩選GAL4 AD/cDNA融合文庫；目標(biāo)蛋白-DNA的相互作用驅(qū)動AUR1-C抗性基因表達，從而能篩選到AbA抗性酵母；
Matchmaker Gold
酵母單雜交系統(tǒng)
酵母報告載體，配合Matchmaker Gold 酵母單雜交篩選系統(tǒng)的陽性對照載體；含p53結(jié)合序列（順式作用元件）；AbA抗性基因AUR1-C的表達受GAL4 AD-p53與p53結(jié)合序列的相互作用而誘發(fā)；p53-AbAi在酵母細胞內(nèi)不能游離繁殖，僅當(dāng)整合進入宿主染色體才可以穩(wěn)定存在，通過載體上的URA3基因和酵母菌株上的非功能ura3-52 locus發(fā)生同源重組以實現(xiàn)整合。另，含Col E1復(fù)制起始子和AmpR，可實現(xiàn)大腸桿菌內(nèi)的擴增和復(fù)制。
基本特性：
- 同義名：短梗霉素A
- 分子式：C60H92N8O11
- 分子量：1100 Da
- 純度：≥95%
- 熔點：155-157℃
- 溶解性：不溶于水，易溶于甲醇、乙醇（0.5-5mg/ml）
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或直接參考Clontech官網(wǎng)：http://www.clontech.com/CN/Products/Protein_Interactions_and_Profiling/Yeast_Two-Hybrid/Aureobasidin?sitex=10022:22372:US
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上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
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