本蛋白酶K不含DNase，不含RNase，無核酸殘留。
本蛋白酶K酶活力≥30U/mg，純度≥95% (電泳)。在pH7.5、37℃，以血紅蛋白為底物，1分鐘內(nèi)可以產(chǎn)生相當于1微摩爾酪氨酸Folin陽性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的量，定義為一個單位蛋白酶K酶活力。
本蛋白酶K在很寬的pH范圍內(nèi)有效，有效的pH范圍為pH4.0-12.5，pH范圍為pH7.5-8.0。
蛋白酶K的反應溫度為65℃，但在65℃或更高溫度時，蛋白酶K自身也會非常迅速地降解。很多時候反應溫度選擇50-55℃。
在0.2-1% SDS或約10mM尿素存在的情況下，蛋白酶K顯示更高的酶活性。蛋白酶K的常用工作濃度為0.05-1mg/ml，根據(jù)所用緩沖液是否含有SDS、尿素、pH是否適合、溫度是否適合等因素確定具體的工作濃度。
常用濃度的EDTA、Triton X-100、Tween 20、Sarkosyl、鹽酸胍對蛋白酶K的活力影響不大。
由于蛋白酶K屬于一種廣譜絲氨酸蛋白酶，所以可被某些絲氨酸蛋白酶的抑制劑如PMSF、AEBSF等所抑制。