濾紙酶（Filter paper Activity，FPA）試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法50管/24樣
注 意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
濾紙酶（Filter paper Activity，F(xiàn)PA）試劑盒測(cè)定意義：
纖維素酶是由微生物產(chǎn)生的多組分的酶系，能水解纖維素β-1,4葡萄糖苷鍵生成葡萄糖，研究濾紙酶活力對(duì)纖維素酶的研究具有非常重要的意義。
測(cè)定原理：
濾紙酶水解濾紙產(chǎn)生的還原糖能與3,5-二硝基水楊酸生成紅棕色氨基化合物，在540nm處有光吸收，在一定范圍內(nèi)反應(yīng)液顏色深淺與還原糖的量成正比，可測(cè)定計(jì)算得濾紙酶的活力。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、研缽、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制：
試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體40mL×1瓶，4℃保存。
濾紙條：50mg×50條。
酶液提取：
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，冰浴勻漿后于4℃，12000rpm離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：蒸餾水體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，12000rpm離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測(cè)。
濾紙酶（Filter paper Activity，F(xiàn)PA）試劑盒測(cè)定操作：
1. 根據(jù)樣本數(shù)量取兩倍數(shù)量的濾紙條和Ep管，每支Ep管中放入一個(gè)卷狀濾紙條（注意要放入底部），作為底物。
2. 對(duì)照管：取200μL滅活的酶液，加入500μL試劑一，充分混勻，再加入放有濾紙條的Ep管中，標(biāo)注為對(duì)照管。
3. 測(cè)定管：取200μL酶液，加入500μL試劑一，充分混勻，再加入放有濾紙條的Ep管中，標(biāo)注為測(cè)定管。
4. 對(duì)照管和測(cè)定管同時(shí)置于50℃水浴鍋中反應(yīng)30min。
5. 加入800μL試劑二，沸水浴5min，自來(lái)水冷卻后取1mL于1mL玻璃比色皿中測(cè)定540nm處吸光值，分別記為A對(duì)照管和A測(cè)定管。
酶活性計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.2805x - 0.0255，R2 = 0.9991
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：在50℃，pH4.6條件下，每毫克蛋白每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
FPA（U/mg prot）=（△A+0.0255）÷ 0.2805×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 0.891×（△A+0.0255）÷ Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在50℃，pH4.6條件下，每克組織每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
FPA（U/g 鮮重）=（△A+0.0255）÷ 0.2805×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 0.891×（△A+0.0255）÷ W
（3）按液體體積計(jì)算
酶活性定義：在50℃，pH4.6條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
FPA（U/mL）=（△A+0.0255）÷ 0.2805×V反總÷V樣÷T
= 0.891×（△A+0.0255）
（4）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：在50℃，pH4.6條件下，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
FPA（U/104cell）=（△A+0.0255）÷ 0.2805×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）÷V樣總）÷T
= 0.891×（△A+0.0255）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）
V反總：反應(yīng)總體積，1.5mL，V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.2mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min
注意事項(xiàng)：
1. 用干凈的鑷子取出濾紙條，帶手套卷成卷放入Ep管底部。
2. 樣本滅活時(shí)保證同一批樣本處理時(shí)間一致，建議沸水浴十分鐘。
3. 批量樣本測(cè)定之前先做1-2個(gè)樣本的預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值超過(guò)1.2，建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
4. 顯色后取檢測(cè)液時(shí)注意槍頭不要碰到濾紙條，以免帶入毛狀物，影響測(cè)定結(jié)果。
關(guān)鍵字： 濾紙酶（Filter paper Act;濾紙酶（Filter paper Act;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過(guò)公司各部門(mén)員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛(ài)，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國(guó)內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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