果膠酶(pectinase)試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法50管/24樣
注 意 :正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
果膠酶(pectinase)試劑盒測(cè)定意義:
果膠酶(pectinase)是一類(lèi)分解果膠質(zhì)酶類(lèi)的總稱(chēng),包括原果膠酶,果膠酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類(lèi),廣泛存在于植物果實(shí)和微生物中,主要用于食品、釀酒、環(huán)保、醫(yī)藥、紡織及日化用品行業(yè)。
測(cè)定原理:
果膠酶水解果膠生成半乳糖醛酸,具有還原性醛基,與DNS試劑反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì),在540nm有特征吸收峰,測(cè)定540nm處吸光值變化可計(jì)算得果膠酶活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制:
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體30mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×2瓶,4℃保存;臨用前加入12.5mL試劑一,50℃加熱溶解,用不完的試劑4℃保存一周。
試劑三:液體30mL×1瓶,4℃避光保存。
酶液提取:
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2.細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g,4℃離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)液等:直接檢測(cè)。
果膠酶(pectinase)試劑盒測(cè)定操作表:
| 對(duì)照管 | 測(cè)定管 |
試劑二(μL) | 400 | 400 |
50℃水浴溫育5min |
樣本(μL) |
| 100 |
煮沸樣本(μL) | 100 |
|
混勻,50℃水浴反應(yīng)30min |
試劑三(μL) | 500 | 500 |
沸水浴5min,冰浴冷卻終止反應(yīng),8000g,4℃,離心10min,取上清,蒸餾水調(diào)零,1mL玻璃比色皿測(cè)定540nm處吸光值A,△A=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 |
酶活性計(jì)算公式:
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 3.9642x - 0.008;R2 = 0.9996;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度,mg/mL;y為吸光值。
1.按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義:在50℃,pH3.5條件下,每毫克蛋白每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
果膠酶活性(mg/h/mg prot)= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷(V樣×Cpr)÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr
2.按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義:在50℃,pH3.5條件下,每克樣本每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
果膠酶活性(mg/h /g 鮮重)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷W
3. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義:在50℃,pH3.5條件下,每104細(xì)胞每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
果膠酶活性(mg/h /104cell)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷(V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總)÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷細(xì)胞數(shù)量
4.細(xì)胞培養(yǎng)液
果膠酶(pectinase)試劑盒酶活性定義:在50℃,pH3.5條件下,每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
果膠酶活性(mg/h /mL)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷V樣÷T=2.523×(ΔA+0.008)
V反總:反應(yīng)總體積,0.5mL;V樣:反應(yīng)中樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W,樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,0.5h
注意事項(xiàng):
1. 試劑二若有沉淀析出,請(qǐng)置于50℃加熱溶解。
2. 測(cè)定之前請(qǐng)先做預(yù)實(shí)驗(yàn),如果吸光值較高或較低,請(qǐng)用提取液做適當(dāng)?shù)南♂尰蛘呒哟髽颖玖浚⒃谟?jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)或者以實(shí)際加入的樣本體積參與計(jì)算。
3. 煮沸樣本建議在沸水中煮沸10分鐘,以將酶徹底滅活。
關(guān)鍵字: 果膠酶(pectinase)試劑盒;果膠酶(pectinase)試劑盒;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月,是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域,提供科研類(lèi)試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過(guò)公司各部門(mén)員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度,深得新老客戶厚愛(ài),本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神,堅(jiān)持以?xún)?yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國(guó)內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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