細胞培養(yǎng)技術(shù)也叫細胞克隆技術(shù),在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術(shù)。通過細胞培養(yǎng)得到大量的細胞或其代謝產(chǎn)物。因為生物產(chǎn)品都是從細胞得來,所以可以說細胞培養(yǎng)技術(shù)是生物技術(shù)中最核心、最基礎(chǔ)的技術(shù)。原代細胞具有高度的靈敏性,是現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)中常用的細胞之一,原代細胞分離培養(yǎng)技術(shù)也是生物技術(shù)中常用的技術(shù)。下面介紹一種常用的酶消化法分離BMSC的方法。
分離方法
BMSC 的分離:取 4 周齡雄性大鼠頸椎脫臼處死,75% 乙醇浸泡 15 min。無菌條件下分離脛骨、股骨,剪開脛骨、股骨干骺端,再用 1 ml 注射器吸取預(yù)冷磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS)沖洗骨髓腔,獲得骨髓細胞懸液,置于含有 10% FBS 和雙抗(青霉素 100U/ml、鏈霉素 100U/L,PH:7.2-7.4)的 DMEM/F-12 中,37 ℃、95%濕度和 5% CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h后首次半量換液,然后每 3 d 全量換液。BMSC 的傳代:當黏附細胞長到 80% 融合時可進行細胞傳代。倒掉培養(yǎng)瓶中的液體,PBS 沖洗 3 次,加入 0.25% 胰蛋白酶 0.5 mL,輕搖搖動培養(yǎng)瓶,然后培養(yǎng)箱中孵育 5 min。孵育結(jié)束后立即倒掉胰酶,迅速加入 0.5 mL FBS 終止消化,然后加入 5 mL PBS,用移液器輕輕吹打瓶底細胞,傳代比例為 1:3。 實驗結(jié)果上圖我司從事CRO一站式技術(shù)服務(wù)、動物造模、細胞實驗、蛋白、代謝組學(xué)、病理實驗、分子實驗以及細胞課題和動物課題、等我們有P2、SPF級,有活體成像、病理全掃、硬切、流式周期等公司優(yōu)勢:周期短,價格優(yōu)惠,質(zhì)量保證。
BMSC 的分離:取 4 周齡雄性大鼠頸椎脫臼處死,75% 乙醇浸泡 15 min。無菌條件下分離脛骨、股骨,剪開脛骨、股骨干骺端,再用 1 ml 注射器吸取預(yù)冷磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS)沖洗骨髓腔,獲得骨髓細胞懸液,置于含有 10% FBS 和雙抗(青霉素 100U/ml、鏈霉素 100U/L,PH:7.2-7.4)的 DMEM/F-12 中,37 ℃、95%濕度和 5% CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h后首次半量換液,然后每 3 d 全量換液。
BMSC 的傳代:當黏附細胞長到 80% 融合時可進行細胞傳代。倒掉培養(yǎng)瓶中的液體,PBS 沖洗 3 次,加入 0.25% 胰蛋白酶 0.5 mL,輕搖搖動培養(yǎng)瓶,然后培養(yǎng)箱中孵育 5 min。孵育結(jié)束后立即倒掉胰酶,迅速加入 0.5 mL FBS 終止消化,然后加入 5 mL PBS,用移液器輕輕吹打瓶底細胞,傳代比例為 1:3。
實驗結(jié)果上圖
我司從事CRO一站式技術(shù)服務(wù)、動物造模、細胞實驗、蛋白、代謝組學(xué)、病理實驗、分子實驗以及細胞課題和動物課題、等我們有P2、SPF級,有活體成像、病理全掃、硬切、流式周期等公司優(yōu)勢:周期短,價格優(yōu)惠,質(zhì)量保證。
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