概念
免疫組化，免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)，是利用抗原抗體反應(yīng)，通過使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原，對蛋白定位，定性的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。

愛必信組化二抗試劑盒優(yōu)點(diǎn)
 

abs957 即用型高效免疫組化二抗試劑盒
 

基于聚合物技術(shù)+一抗放大劑，高敏感性，一抗可再稀釋2-4倍！
非生物素檢測系統(tǒng)，更低背景！
快速便捷，更短孵育時間！
abs957單品文獻(xiàn)90+，認(rèn)可度高！用的放心！

組分

額外準(zhǔn)備一抗（來源于小鼠或兔子）、PBS 。
該試劑盒組分可用于50張片子，適用于一抗來源為小鼠和兔子的樣本（注意，不是樣本來源），DAB顯色。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
 

圖二 樣本處理

1、取出固定好的樣本，流水沖洗3次，每次5min。
2、脫水、透明、浸蠟處理
75%乙醇（1h）——85%乙醇（1h）——95%乙醇（1h）——100%乙醇（50min）——100%乙醇（50min）——100%乙醇（50min）——二甲苯（40min）——二甲苯（40min）——二甲苯（40min）——63℃石蠟（50min）——63℃石蠟（50min）——63℃石蠟（50min）。
3、包埋處理
脫水結(jié)束后放入預(yù)熱的包埋機(jī)，按要求確定包埋方向進(jìn)行包埋。
4、玻片做好編號標(biāo)記
5、切片：按照切片要求制備切片,切片厚度一般為3-5um。
6、攤片：用毛筆輕托放在46度水浴中攤片。
7、撈片、烤片：切片上組織充分展開后撈片，后置入60℃烘箱內(nèi)進(jìn)行烤片（（烤片時間視組織類型而定，一般組織30min即可，骨組織等要延長時間至1h)），之后便可以進(jìn)行脫蠟。

操作步驟
 

圖三 免疫組化實(shí)驗(yàn)流程

說明：所有的步驟在室溫下操作，加試劑可以直接滴瓶滴定，也可以用移液器，一滴=30-40μL 
1、脫蠟、水化組織切片 二甲苯（5min）——二甲苯（5min）——二甲苯（5min）——100%乙醇（5min）——100%乙醇（5min）——95%乙醇（3min）——85%乙醇（3min）——75%乙醇（3min）——去離子水（5min)。
2、PBS洗2-3次各5分鐘
3、抗原修復(fù) 根據(jù)所應(yīng)用的一抗的特殊要求，對組織切片進(jìn)行預(yù)處理 （抗原修復(fù)：將脫蠟好的切片置入抗原修復(fù)液（根據(jù)一抗說明書要求選擇用檸檬酸鈉或者EDTA），在高壓鍋內(nèi)進(jìn)行高溫抗原修復(fù)，高壓鍋加熱至飽壓，然后繼續(xù)加熱5min，關(guān)閉電源，10min后取出染色盒，室溫冷卻30min或者使用微波修復(fù)，將抗原修復(fù)完的切片組織周圍擦干，用組化筆畫上阻水圈）
4、PBS洗2-3次各5分鐘
5、內(nèi)源性的過氧化物酶封閉 加入100ul A 液孵育十分鐘，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，以減少非特異性背景染色
6、PBS洗2-3次各5分鐘
7、血清封閉 加入100ul B 液孵育五分鐘來減少非特異性染色。注意：此步驟不要超過十分鐘；如果一抗在含有5％至10％正常山羊血清的緩沖液中稀釋，則此步驟可以省略
8、PBS洗2-3次各5分鐘
9、一抗孵育 加一抗，室溫或37℃孵育20分鐘，用量以浸沒樣本區(qū)域?yàn)闇?zhǔn)，可靈活調(diào)節(jié)
10、PBS洗2-3次各5分鐘
11、一抗放大劑孵育 加入100ul C 液孵育十分鐘
12、PBS洗2-3次各5分鐘
13、二抗孵育 加入100ul D 液室溫或37℃孵育十分鐘.注意：此液對光敏感，注意避光
14、PBS洗2-3次各5分鐘
15、DAB試劑配制 配制新鮮底物液：將30ul的 F 液和1ml的 E 液充分混合，即配制成新鮮底物液（該底物液可存放2周）
16、DAB顯色 加入100ul新鮮底物液, 孵育五分鐘 注意：DAB顯色時間需要鏡下控制，選擇最佳顯色時間，做好防護(hù)
17、終止顯色 去離子水沖洗
18、復(fù)染 蘇木素復(fù)染3min左右、自來水沖洗，1%鹽酸酒精中分化1s，自來水沖洗。
19、脫水透明：80%、95%、100%、100%酒精，每步5min、二甲苯5min、兩次。
20、中性樹膠封片 蓋住玻片時從一端傾斜45°，小心不要產(chǎn)生氣泡。

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上海優(yōu)寧維生物科技股份有限公司

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