Lin?（Lineage-negative，譜系陰性)是一個(gè)細(xì)胞檢測(cè)中的重要概念，用于標(biāo)識(shí)不屬于成熟免疫細(xì)胞的細(xì)胞群。Lin? 細(xì)胞群體不表達(dá)常見(jiàn)的免疫細(xì)胞譜系標(biāo)志物（如 T 細(xì)胞、B 細(xì)胞、NK 細(xì)胞等），因此通常代表未分化的前體細(xì)胞或特殊的免疫調(diào)控細(xì)胞，例如 MDSCs（髓系來(lái)源的抑制性細(xì)胞）、造血干細(xì)胞或其他免疫抑制性細(xì)胞。這一篩選策略在免疫學(xué)和腫瘤學(xué)研究中有著重要應(yīng)用。
在流式細(xì)胞檢測(cè)中，Lin? 是一組譜系抗體混合物，用于排除成熟免疫細(xì)胞，保留未分化的前體細(xì)胞或目標(biāo)群體。具體來(lái)說(shuō)，這些抗體靶向以下譜系陽(yáng)性標(biāo)志物：
■T 細(xì)胞：CD3
■B 細(xì)胞：CD19 或 CD20
■NK 細(xì)胞：CD56
■單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞：CD14
■粒細(xì)胞：CD66b
Fig 1.Lineage Cocktail 4 和 7-AAD 的雙重篩選
通過(guò)這些抗體混合物，流式細(xì)胞儀能夠檢測(cè)并排除表達(dá)這些標(biāo)志物的成熟細(xì)胞，只留下Lin? 細(xì)胞用于進(jìn)一步分析。
Lin? 的實(shí)驗(yàn)流程
■抗體孵育：將一組專門針對(duì)成熟免疫細(xì)胞的抗體混合物（如 CD3 針對(duì) T 細(xì)胞，CD19 針對(duì) B 細(xì)胞，CD56 針對(duì) NK 細(xì)胞等）加入到細(xì)胞樣本中。將樣本在 20-30 分鐘內(nèi)孵育，這樣抗體能與成熟細(xì)胞上的特定標(biāo)志物結(jié)合。
■流式檢測(cè)與分析：把孵育好的樣本放進(jìn)流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。儀器根據(jù)抗體發(fā)出的熒光信號(hào)，找到那些表達(dá)成熟細(xì)胞標(biāo)志物的細(xì)胞（這些細(xì)胞會(huì)被標(biāo)記為陽(yáng)性）。
■篩選 Lin? 細(xì)胞：剩下的就是沒(méi)有綁定這些抗體的 Lin? 細(xì)胞，它們是未分化的前體細(xì)胞或具有調(diào)控功能的免疫抑制細(xì)胞。這些 Lin? 細(xì)胞代表的是目標(biāo)細(xì)胞群體，比如造血干細(xì)胞（HSCs）或 MDSCs，用于接下來(lái)的分析。
Lin? 在免疫和腫瘤研究中的應(yīng)用
■MDSCs（髓系來(lái)源的抑制性細(xì)胞）研究：
MDSCs 是未成熟的髓系細(xì)胞，具有強(qiáng)大的免疫抑制功能。在分析 MDSCs 時(shí)，Lin? 標(biāo)志物能夠排除 T 細(xì)胞、B 細(xì)胞等成熟免疫細(xì)胞，讓研究者專注于這些未成熟的免疫抑制細(xì)胞。
■造血干細(xì)胞分析：
在造血干細(xì)胞研究中，Lin? 篩選可以幫助排除已經(jīng)分化的免疫細(xì)胞，從而識(shí)別和分離未分化的造血干細(xì)胞。
■腫瘤微環(huán)境的研究：
Lin? 細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中往往代表未成熟的調(diào)控細(xì)胞，如 MDSCs，它們通過(guò)抑制 T 細(xì)胞和 NK 細(xì)胞的功能，促進(jìn)腫瘤免疫逃逸和腫瘤進(jìn)展。
簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，這個(gè)實(shí)驗(yàn)就像一個(gè)過(guò)濾器，用抗體把我們不需要的成熟免疫細(xì)胞篩掉，剩下那些沒(méi)有被抗體“抓住”的細(xì)胞——即Lin? 細(xì)胞，就是我們想要研究的對(duì)象。這些細(xì)胞常用于研究免疫抑制機(jī)制或干細(xì)胞功能。