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明膠包被培養(yǎng)器皿的使用方法

2020/10/18 17:56:53

背景及概述[1]

培養(yǎng)器皿又稱彼得立皿或陪替氏皿。由科赫的學(xué)生Petri發(fā)明,故名。一種圓形、淺層、平底、垂直邊、有蓋的玻璃或塑料皿,形狀有大有小,但以直徑9cm者最為常用。皿蓋與皿底的外形幾乎完全相同,惟直徑稍大而已。有時(shí)為避免玻璃皿蓋上的冷凝水滴下而影響正常培養(yǎng)(如測(cè)定抗生素效價(jià)),也有改用素?zé)蓤A板做皿蓋的。培養(yǎng)皿是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中最常用的固體培養(yǎng)(平板培養(yǎng))器皿。明膠是由膠原水解后得到的水溶性蛋白多聚體。明膠包被培養(yǎng)器皿能促進(jìn)多種細(xì)胞的貼壁和生長(zhǎng),可用于培養(yǎng)正常或轉(zhuǎn)染細(xì)胞,如血管內(nèi)皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞、胰島細(xì)胞等,明膠包被培養(yǎng)器皿具有以下特點(diǎn):① 能促進(jìn)多種細(xì)胞的貼壁;② 預(yù)包被的明膠層節(jié)省實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備的時(shí)間和費(fèi)用;③ 批次間的穩(wěn)定性保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。

使用方法[1]

明膠包被培養(yǎng)器皿使用方法如下:

1.配置0.1%的明膠溶液:

1)準(zhǔn)確稱量0.1g的明膠,溶于mp(過熱蒸汽)的三蒸水中,放進(jìn)56℃的水浴箱中進(jìn)行充分溶解;

2)使用0.22um的濾器對(duì)明膠溶液進(jìn)行過濾除菌。過濾的作用,一來是可以除菌,二來是除去溶液中沒有溶解的顆粒,這樣接下來的鋪板才能更加均勻。

3)除菌完畢后,將明膠溶液放在培養(yǎng)瓶中用封口膜封好,無菌存儲(chǔ)備用。

2.包被培養(yǎng)皿:

1)取消毒過的干凈培養(yǎng)皿,加入適量的0.1%的明膠,以沒過整個(gè)底面之后再稍微加一點(diǎn)為宜。這個(gè)過程不能產(chǎn)生氣泡,不然就會(huì)導(dǎo)致明膠鋪的不均勻,甚至有些地方?jīng)]有鋪上,這樣不利于細(xì)胞的貼壁;

2)加入明膠之后,將培養(yǎng)皿放置在超凈臺(tái)內(nèi)30分鐘,或者放置在37℃飽和濕度培養(yǎng)箱里20分鐘;

3)吸干凈明膠后,可直接使用,或在飽和濕度的培養(yǎng)箱中放30分鐘,效果更佳。

主要參考資料

[1] 微生物學(xué)詞典

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