背景^[1-6]

p53 Rabbit Monoclonal Antibody(p53兔單克隆抗體)是p53作為抗原對兔進行免疫后篩選出只產(chǎn)生的p53抗體的B淋巴細胞，再將B細胞通過細胞融合技術與骨髓瘤雜交然后篩選出只分泌p53抗體的雜交瘤細胞，最后通過層析柱純化制的高純度的p53抗體兔單克隆抗體。p53是基因組中最重要的腫瘤抑制因子。它響應于許多基因毒性應激，其激活其轉錄因子活性，進而通過激活p21 Cip/WAF的表達引起細胞周期停滯。

失去其DNA結合功能的突變型p53干擾天然p53的活性并導致致癌轉化?；蛘撸D化可能是由Mdm2/Hdm2（一種對p53特異的泛素連接酶）的過表達引起的，這導致其不穩(wěn)定。p53的失活通常與NFκB（NFκBp50和NFκBp65）的過度活化同時發(fā)生，這兩者都用于抑制細胞凋亡。p53抗體克隆DO1特異性識別氨基酸20-25之間人p53蛋白N-末端的表位。

p53是一種腫瘤抑制基因，在各種散發(fā)性和家族性癌癥中發(fā)生突變。并且p53作為核蛋白，介導細胞周期停滯以響應DNA損傷，因此在維持基因組穩(wěn)定性方面是重要的。最近的結果表明，ATM響應于對SER15的DNA損傷，p53的磷酸化增強，這是一種降低p53阻止細胞生長的能力的突變。p53腫瘤抑制基因編碼轉錄因子，其有助于幾種細胞活動，包括細胞凋亡，瞬時生長停滯和持續(xù)生長停滯或衰老。

在所有人類癌癥的約一半中發(fā)現(xiàn)p53基因內的突變。在正常運作的細胞中，MDM2蛋白與p53結合，并通過增加其對26S蛋白體的蛋白水解的易感性來維持p53的低水平。經(jīng)歷應激的細胞喪失了MDM2與p53結合的能力，結果p53水平增加，然后導致細胞周期停滯或細胞凋亡（3和4）。p53誘導的細胞周期停滯或凋亡可以通過幾種基因的轉錄調節(jié)來實現(xiàn)，包括細胞周期抑制因子p21，DNA修復基因GADD45和凋亡誘導因子Bax。

應用^[7][8]

p53兔單克隆抗體可用于骨肉瘤細胞凋亡的機制研究：

骨肉瘤因其惡性程度高、轉移早,目前臨床上治療多采用手術配合化療、放療的綜合療法,但限于手術治療的致殘率高、假體功能差,放化療毒副反應大,晚期腫瘤容易形成對化療藥物的耐受,極易復發(fā),再次治療也極為棘手,故而骨肉瘤的遠期生存率較低,療效難如人意,傳統(tǒng)療法的局限使得骨肉瘤的新型療法如生物治療、免疫治療、基因治療和微生物純化產(chǎn)物治療正日益成為研究和臨床的焦點與熱點。

近年Yamada研究報道由假單孢細菌分泌的含銅細菌氧化還原蛋白Azurin,可以與P53蛋白結合形成復合體,抑制P53降解,從而穩(wěn)定P53蛋白。它在體外細胞試驗和體內荷瘤裸鼠實驗中均可誘導P53野生型的單核巨噬細胞、黑色素瘤細胞、乳腺癌細胞凋亡,而在呈現(xiàn)P53突變或缺失的黑色素瘤細胞、乳腺癌細胞中細胞毒性大大降低,其細胞毒性具有明顯的P53選擇性。尤為關鍵的是,在惡性黑色素瘤細胞、乳腺癌細胞的裸鼠體內移植瘤瘤塊中,野生型Azurin可以促使移植瘤退變,抑制移植瘤瘤塊生長,誘導腫瘤細胞凋亡,而裸鼠體內卻沒有發(fā)現(xiàn)明顯的毒副作用。

這一發(fā)現(xiàn)為活菌產(chǎn)物純化蛋白Azurin應用于臨床腫瘤治療帶來了希望和前景。P53、ROS、線粒體途徑在Azurin細胞毒性中的分子機制：Azurin增強p53轉錄活性↑→p53胞內水平↑→谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)↓→GSH↓→ROS↑→線粒體內膜心磷脂氧化→線粒體膜電位(△Ψm)↓→Bax移位線粒體→細胞色素C、AIF釋放進入胞質→激活線粒體途徑→caspase活化→骨肉瘤細胞凋亡。

P53基因調控的氧化還原狀態(tài)失衡(GSH耗竭和ROS增高)在其中尤為關鍵。此外,通過P53依賴性或者非P53依賴性途徑,Azurin與低劑量化療藥物如順鉑(Cisplatin,CDDP)、氨甲喋呤(MTX)、阿霉素(ADM)和異環(huán)磷酰胺(IFO)的聯(lián)合給藥具有協(xié)同效應,Azurin對上述化療藥物體外骨肉瘤細胞的細胞毒性具有增敏效應,其P53依賴性增敏機制與P53調控的氧化應激密切相關,而其不依賴于P53的增敏機制則與氧自由基水平無關。

參考文獻

[1]Matrine induces caspase-dependent apoptosis in human osteosarcoma cells in vitro and in vivo through the upregulation of Bax and Fas/FasL and downregulation of Bcl-2[J].Cheng Zhen Liang,Jia Kai Zhang,Zhongli Shi,Bing Liu,Chengchun Q.Shen,Hui Min Tao.Cancer Chemotherapy and Pharmacology.2012(2)

[2]IFN-γenhances HOS and U2OS cell lines susceptibility toγδT cell-mediated killing through the Fas/Fas ligand pathway[J].Zhaoxu Li,Qiang Xu,Huiqin Peng,Ruilin Cheng,Zhengwang Sun,Zhaoming Ye.International Immunopharmacology.2011(4)

[3]p53 siRNA inhibits apoptosis of U2OS cells treated with azurin[J].Xiaobo Yan,Jie Feng,Zhaoming Ye,Xudong Miao,Weixu Li,Disheng Yang.Molecular Medicine Reports.2011(6)

[4]Enhanced anticancer effect of gemcitabine by genistein in osteosarcoma:the role of Akt and nuclear factor-κB[J].Bo Zhang,Zhong-Li Shi,Bing Liu,Xiao-Bo Yan,Jie Feng,Hui-Min Tao.Anti-Cancer Drugs.2010(3)

[5]Mesenchymal stem cells expressing TRAIL lead to tumour growth inhibition in an experimental lung cancer model[J].AndreaMohr,MarkLyons,LauraDeedigan,TinaHarte,GeorginaShaw,LindaHoward,FrankBarry,TimO’Brien,RalfZwacka.Journal of Cellular and Molecular Medicine.2009(6b)

[6]Targeting TRAIL death receptors[J].CNAM Oldenhuis,JH Stegehuis,AME Walenkamp,S de Jong,EGE de Vries.Current Opinion in Pharmacology.2008(4)

[7]Targeting the extrinsic apoptosis pathway in cancer[J].Avi Ashkenazi.Cytokine and Growth Factor Reviews.2008(3)

[8]張躍.P53介導的ROS及線粒體通路在Azurin及其聯(lián)合化療藥物誘導骨肉瘤細胞凋亡的機制探討[D].浙江大學,2013.