背景[1-3]
EHRLICH蘇木素染色液為堿性天然染料，可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的主要成分是DNA，在DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木素成熟的方法有自然氧化法、化學(xué)氧化法。自然氧化是指暴露于光和空氣中，這個過程比較緩慢，約需3～6個月不等，但生成物染色能力可維持很長時間。Ehrlich和Delafield蘇木素就屬于這種。EHRLICH蘇木素染色液作為一種良好的核染色液，也可用于黏蛋白染色如軟骨的黏液多糖，骨和軟骨的染色也推薦使用EHRLICH蘇木素染色液。
EHRLICH蘇木素染色液非常穩(wěn)定，成熟后密封可保存2年。對核染色質(zhì)染得很清晰細(xì)致，染色時間也稍長，約15～20min。用此染色液對冷凍切片染色則不理想。
EHRLICH蘇木素
自備材料：
1.酸性乙醇分化液
2.藍(lán)化液，如稀氨水、碳酸鋰溶液等
3.系列乙醇
4.伊紅染色液
5.4%多聚甲醛
使用說明：
(一)石蠟切片染色
1.切片脫蠟至水
2.染色
a.改良Lillie-Mayer蘇木素染色液染色5～8min
b.自來水或蒸餾水沖洗5～10s
c.(可選)鹽酸乙醇分化2～5s
d.自來水沖洗20～30s
e.(可選)藍(lán)化液返藍(lán)20～40s
f.自來水沖洗30～60s
g.伊紅染色液染色3～5min
h.自來水沖洗1～5s
3.脫水、透明、中性樹脂封片。
(二)冰凍切片染色
1.乙醚-乙醇混合固定液5～10s
2.自來水沖洗2～5s
3.改良Lillie-Mayer蘇木素染色液滴染1～2min(可加熱至50℃)。
4.自來水沖洗2～5s
5.(可選)鹽酸乙醇分化2～5s
6.自來水沖洗2～5s
7.(可選)藍(lán)化液返藍(lán)2～5s
8.自來水沖洗5～10s
9.伊紅染色液染色2～5s
10.自來水沖洗1～2s
11.常規(guī)脫水、透明、中性樹脂封片
(三)細(xì)胞染色
1.4%多聚甲醛固定10～20min。
2.自來水沖洗2次，每次2min。
3.蒸餾水沖洗2次，每次2min。
4.染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟，作用時間應(yīng)相應(yīng)縮短。
染色結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維等呈深淺不一的紅色；角蛋白、紅細(xì)胞等呈明亮的橙紅色。
注意事項(xiàng)：
1.切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。系列乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液。
2.鹽酸乙醇分化時間應(yīng)根據(jù)切片厚薄、組織類別以及新舊而定，另外分化后自來水沖洗時間應(yīng)該足夠，以便徹底清洗酸。
3.藍(lán)化液常使用0.2～1%氨水或Scott促藍(lán)液或0.1～1%碳酸鋰溶液。
4.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
應(yīng)用[4][5]
EHRLICH蘇木素染色液可以用于陰道鏡及顯微鏡下蘇木素染色對宮頸病變早期診斷價值的研究
通過分析宮頸鱗狀上皮EHRLICH蘇木素染色液染色后直接冰凍切片病理檢查結(jié)果和HE染色石蠟切片病理結(jié)果，了解宮頸鱗狀上皮蘇木素富染區(qū)(稱之染色陽性)是否能預(yù)知病理結(jié)果。通過分析CIN組中符合中醫(yī)帶下病診斷的病例之不同證型，了解CIN與中醫(yī)帶下病各證型之間的關(guān)系。
方法：收集73例行陰道鏡檢查的病例，將其分為兩組，一組為宮頸鱗狀上皮蘇木素染色(±)的病人；另一組為宮頸鱗狀上皮EHRLICH蘇木素染色液染色(+)病人，活檢宮頸蘇木素富染區(qū)組織。將宮頸蘇木素富染區(qū)組織活檢送病理做快速冰凍切片(不再作任何染色處理)，直接鏡下觀察富染區(qū)細(xì)胞核染色情況，再將其余組織用10％甲醛固定，石蠟包埋，切片后作HE染色檢查。
結(jié)果：60例CIN和炎癥患者，宮頸鱗狀上皮蘇木素染色后直接冰凍切片與HE石蠟切片病理結(jié)果對比，兩者無統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.833)，說明EHRLICH蘇木素染色液染色后蘇木素富染區(qū)能預(yù)知病理結(jié)果。在總共46例CIN及宮頸癌患者中，有31例符合中醫(yī)帶下病的診斷，占CIN的67.4％，其中腎虛型6例(占19.4％)，脾虛型5例(占16.1％)，濕熱型19例(占61.3％)，濕毒型1例(占3.2％)。故CIN的帶下病患者中，濕熱型是最主要的證型。結(jié)論：陰道鏡下宮頸蘇木素染色可行，陰道鏡檢查宮頸鱗狀上皮EHRLICH蘇木素染色液富染結(jié)果和脫落細(xì)胞學(xué)結(jié)合的檢查方法，可預(yù)知病理檢查結(jié)果。在CIN的帶下病患者中，濕熱型是最主要的證型，CIN中的帶下病是以濕熱為其主要病因。
參考文獻(xiàn)
[1]Temporal trends in the epidemiology of cervical cancer in South Africa(1994-2012).[J].Olorunfemi Gbenga;;Ndlovu Ntombizodwa;;Masukume Gwinyai;;Chikandiwa Admire;;Pisa Pedro T;;Singh Elvira.International journal of cancer.2018
[2]Carcinogenicity of Human Papillomavirus(HPV)Types in HIV-Positive Women:A Meta-Analysis From HPV Infection to Cervical Cancer.[J].Clifford Gary M;;Tully Stephen;;Franceschi Silvia.Clinical infectious diseases:an official publication of the Infectious Diseases Society of America.2017
[3]Cancer statistics in China,2015.[J].Chen Wanqing;;Zheng Rongshou;;Baade Peter D;;Zhang Siwei;;Zeng Hongmei;;Bray Freddie;;Jemal Ahmedin;;Yu Xue Qin;;He Jie.CA:a cancer journal for clinicians.2016
[4]Cancer statistics,2014.[J].Siegel Rebecca;;Ma Jiemin;;Zou Zhaohui;;Jemal Ahmedin.CA:a cancer journal for clinicians.2014
[5]嚴(yán)燕.陰道鏡及顯微鏡下蘇木素染色對宮頸病變早期診斷價值的研究[D].南京中醫(yī)藥大學(xué),2006.