背景^[1-3]

大鼠抑瘤素M(OSM)Elisa試劑盒是一種通過(guò)酶聯(lián)免疫技術(shù)（Elisa）原理特異性識(shí)別樣本中大鼠抑瘤素M(OSM)的商品化試劑盒。大鼠抑瘤素M(OSM)Elisa試劑盒可以通過(guò)識(shí)別樣本中大鼠抑瘤素M(OSM)的類別及含量為科研及臨床診斷提供依據(jù)。

需要注意的是若用于臨床診斷的Elisa試劑盒需取得上市所在國(guó)的醫(yī)療器械資質(zhì)。同時(shí)大鼠抑瘤素M(OSM)Elisa試劑盒的診斷結(jié)論存在一定的局限性，受限于樣本保存不當(dāng)、實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范，方法學(xué)靈敏度等原因不能作為臨床判斷的唯一依據(jù)。

大鼠抑瘤素M(OSM)Elisa試劑盒技術(shù)原理：方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結(jié)合，此種結(jié)合不會(huì)改變抗體的免疫學(xué)特性，也不影響酶的生物學(xué)活性。此種酶標(biāo)記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反應(yīng)。因此，可通過(guò)底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定有無(wú)相應(yīng)的免疫反應(yīng)，顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過(guò)檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定，這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來(lái)，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測(cè)方法。

大鼠抑瘤素M(OSM)Elisa試劑盒

大鼠抑瘤素M(OSM)Elisa試劑盒樣品收集、處理及保存方法:

1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

大鼠抑瘤素M(OSM)Elisa試劑盒操作流程如下:

(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。

(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。

(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的抗體工作液50μl。

(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。

(6)洗板,同(4)。

(7)每孔加1:5000稀釋的抗體工作液100μl。

(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。

(9)洗板,同(4)。

(10)每孔加TMB顯色液100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。

(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。

(12)分別測(cè)450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的OD值后,計(jì)算S/N值。

應(yīng)用^[4][5]

大鼠抑瘤素M(OSM)Elisa試劑盒可以用于抑瘤素M與哮喘大鼠氣道重塑的關(guān)系研究

觀察抑瘤素M在哮喘大鼠氣道壁中的表達(dá),探討抑瘤素M的表達(dá)與哮喘氣道重塑的關(guān)系,為哮喘的防治尋找可能的靶點(diǎn)。

方法：選用30只Wistar雄性健康大鼠,鼠齡8W,體重200-220g。將30只Wistar大鼠隨機(jī)分為二組：對(duì)照組和哮喘組。第一天哮喘組用用抗原混懸液2m1(含卵白蛋白100mg,氫氧化鋁200mg、滅活百日咳桿菌菌苗6×109個(gè))腹腔注射致敏。第15天開(kāi)始1%卵白蛋白溶液霧化激發(fā),每天一次,每次20—30分鐘,共8W,建立哮喘模型。對(duì)照組第一天用第1天用生理鹽水2m1腹腔注射,第15天開(kāi)始用生理鹽水霧化吸入,余同哮喘組。末次激發(fā)結(jié)24小時(shí)后,取各只大鼠的支氣管肺泡灌洗液行嗜酸性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞,淋巴細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)。采取肺組織標(biāo)本,采用HE染色觀察氣道形態(tài)學(xué)改變；采用免疫組化染色和大鼠抑瘤素M(OSM)Elisa試劑盒檢測(cè)并經(jīng)計(jì)算機(jī)圖像分析測(cè)定氣道壁中Oncostatin M蛋白表達(dá)水平；同時(shí)采用RT-PCR法測(cè)定肺組織中Oncostatin M mRNA的表達(dá)。

大鼠抑瘤素M(OSM)Elisa試劑盒結(jié)果：(1)哮喘組大鼠支氣管肺泡灌洗液嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)為(9.21±1.24)與正常對(duì)照組比較(0.71±O..01),明顯增加,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。而哮喘組大鼠支氣管肺泡灌洗液巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞,淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)分別為(64.81±2.52)(11.52±2.02)(13.24±2,36)],與正常對(duì)照組[(80.19±2.02)(9.14±2.57)(10.54±1.50)]比較,差異具無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。病理證實(shí)哮喘模型基本成功。(2)哮喘組大鼠總管壁厚度(WAt/Pbm),氣管內(nèi)壁厚度(WAi/Pbm)及平滑肌層厚度(WAm/Pbm)分別為[(132.06±6.13)(81.52±1.55)(43.71±5.67)],與正常對(duì)照組[(79.84±2.40)(61.12±3.81)(16.78±2.13)]比較,顯著增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05。(3)哮喘組肺組織中抑瘤素mRNA表達(dá)為(0.95±0.04),高于正常對(duì)照組的(0.45±0.16),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。(4)抑瘤素M大鼠抑瘤素M(OSM)Elisa試劑盒高表達(dá)及免疫組化染色陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度,哮喘組(0.34±0.13)明顯強(qiáng)于對(duì)正常對(duì)照組大鼠(0.15±0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。(5)氣管壁抑瘤素M水平與哮喘組大鼠總管壁厚度,氣管內(nèi)壁厚度,平滑肌層厚度呈正相關(guān)(R值分別為0.768、0.532、0.745,P均<0.05),對(duì)照組無(wú)相關(guān)性(R值分別為-0.135、-0.308、-0.325,P均>0.05)。(6)哮喘組嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)與抑瘤素M水平正相關(guān),(R=0.970,P=0.000),而中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞數(shù)與抑瘤素M水平無(wú)相關(guān)(R值分別為0.020、0.180、-0.256,P均>0.05)。

參考文獻(xiàn)

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