背景^[1-3]

頭孢霉屬(Cephalosporin)是一類廣譜抗生素，常用于治療多種細菌感染。頭孢霉屬通用PCR試劑盒是一種用于擴增DNA的試劑盒，可以用于檢測和鑒定多種細菌的基因。

頭孢霉屬通用PCR試劑盒通常包含以下成分：

PCR緩沖液：用于提供反應所需的pH值和離子濃度。

dNTPs:用于合成DNA的原料。

Taq DNA聚合酶：用于擴增DNA的酶。

引物：特異性地結合到目標基因上的短片段，用于引導PCR反應。

MgCl2:用于穩(wěn)定Taq DNA聚合酶的活性。

瓊脂糖或凝膠：用于分離PCR產物。

使用頭孢霉屬通用PCR試劑盒時，首先需要提取待測細菌的DNA，然后將提取的DNA與引物混合，加入PCR反應體系中進行擴增。PCR反應結束后，將產物進行電泳分離，根據產物的大小和數量來判斷是否存在頭孢霉屬基因。

需要注意的是，頭孢霉屬通用PCR試劑盒只能檢測到頭孢霉屬基因的存在，不能確定具體的頭孢霉屬菌株。如果需要鑒定具體的菌株，需要使用特異性引物進行PCR擴增。

頭孢霉屬通用PCR試劑盒

頭孢霉屬通用PCR試劑盒的操作步驟如下：

1.樣本采集：從患者體內采集血液、糞便、組織等樣本，并將其保存在無菌容器中。

2.DNA提取：將采集到的樣本進行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取試劑盒。提取后的DNA應保存在-20°C或更低的溫度下。

3.PCR反應體系準備：根據頭孢霉屬通用PCR試劑盒說明書的要求，配制PCR反應體系，包括引物、熒光探針、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反應：將提取的DNA加入到PCR反應體系中，進行PCR反應。反應條件和時間根據試劑盒說明書的要求進行設置。

5.結果分析：將PCR反應后的產物進行熒光信號檢測，根據熒光信號的出現情況判斷是否存在頭孢霉屬的感染。

應用^[4][5]

頭孢霉屬通用PCR試劑盒可以用于福州溫室黃瓜枯萎病微生態(tài)研究

根據真菌形態(tài)特征,從溫室黃瓜不同生態(tài)位初步鑒定出的絲狀真菌35屬,酵母菌6屬,其中根際初步鑒定出25屬,以鐮刀菌屬、青霉屬、木霉屬為優(yōu)勢菌?；疾≈仓旮魃诟H真菌種類均少于正常植株,在花期,黃瓜枯萎病發(fā)病處于高峰期時,患病植株的根際真菌多樣性水平降到最低。病株的根、莖維管束真菌以鐮刀菌為主,但種類較正常植株少;枯萎病株葉棲真菌以木霉為主;枯萎病植株的花表、果表的以酵母菌為主,真菌多樣性較正常植株豐富。根據放線菌形態(tài)特征,從溫室黃瓜根際共分離并鑒定出放線菌15個屬,以鏈霉菌屬、鏈輪菌屬為優(yōu)勢菌。正常根際全生育期都存在鏈輪菌屬、鏈霉菌屬,而病害根際在前期以鏈霉菌屬為主,末期才分離到鏈輪菌屬。根據細菌形態(tài)特征、生理生化及頭孢霉屬通用PCR試劑盒16 srDNA序列,從溫室黃瓜根際分離并鑒定出的細菌種類有9屬。主要種類為芽孢桿菌,似桿菌類群,假單胞菌,短穩(wěn)桿菌,類球紅細菌,奇異變形菌。病菌降低的黃瓜根際細菌種類豐富度。T-RFLP及頭孢霉屬通用PCR試劑盒PCR-DGGE方法對黃瓜枯萎病、根結線蟲病、黃瓜枯萎病與根結線蟲病復合侵染的根際細菌的多樣性進行分析。

在頭孢霉屬通用PCR試劑盒PCR-DGGE分析中發(fā)現,除枯萎病和根結線蟲復合侵染樣品外,假單胞菌是優(yōu)勢菌。T-RFLP及PCR-DGGE方法則顯示病菌提高了根際細菌種類豐富度,只是細菌種群的均度下降。黃瓜患枯萎病后,亞硝化細菌、硝化細菌、纖維素分解細菌、氨化細菌、硫化細菌等功能菌群數量相應減少,反硝化細菌、反硫化細菌功能菌群數量相應增加,而自生固氮菌變化不穩(wěn)定。秋茬患病植株功能菌群數量減少幅度比春茬減少幅度大。黃瓜感染枯萎病后,黃瓜根際過氧化氫酶活性、脲酶活性、纖維素酶活性、堿性磷酸酶活性減弱。

參考文獻

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[4]Assessment of arbuscular mycorrhizal fungi diversity in the rhizosphere of Viola calaminaria and effect of these fungi on heavy metal uptake by clover[J].C.Tonin;;P.Vandenkoornhuyse;;E.J.Joner;;J.Straczek;;C.Leyval.Mycorrhiza,2001

[5]余文英.福州溫室黃瓜枯萎病微生態(tài)研究[D].福建農林大學,2010.