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酶標儀的分類及常見應用

2023/11/30 9:07:08 作者:小滿

酶標儀(微孔板讀板機)是一種常見的實驗儀器,主要用于測量微孔板孔內(nèi)的化學反應、生物反應及相關(guān)特性。

酶標儀

傳統(tǒng)酶標儀是指具備吸收光檢測功能的酶聯(lián)免疫檢測儀,隨著光學技術(shù)的發(fā)展和試劑類型的不斷豐富,如今酶標儀所具備的檢測功能日益豐富,在光吸收檢測(Abs)基礎(chǔ)上增加了熒光強度(FI)、發(fā)光檢測(Lum)、熒光偏振(FP)、時間分辨熒光(TRF)、Western-Blot檢測、均相時間分辨熒光(HTRF),AlphaScreen/AlphaLISA等多種檢測技術(shù),每一種技術(shù)都具有獨特的應用價值。

一、酶標儀分類

1.基于濾光方式不同可分為:濾光片式酶標儀、光柵式酶標儀。

2.按功能劃分可分為:光吸收酶標儀、化學發(fā)光酶標儀、熒光酶標儀、多功能酶標儀。

①光吸收酶標儀:是用來進行可見光與紫外光吸光度的檢測,特定波長的光通過微孔板中的樣品后,光能量被吸收,而被吸收的光能量與樣品的濃度呈一定的比例關(guān)系,由此可以用來定性和定量的檢測,光吸收的檢測技術(shù)成熟,成本低,操作簡單,但是動態(tài)范圍窄,靈敏度比較低,特異性不強,一般可見光和紫外光分別采用鎢燈及氘燈作為光源,而紫外/可見酶標儀是可以將兩種光源進行切換,適應不同測量波長的需求。

②熒光酶標儀:是用來進行熒光的檢測,通過激發(fā)光柵分光后的特定波長的光照射到被熒光物質(zhì)標定的樣品上后,會發(fā)出波長更長的發(fā)射光,通過發(fā)射光柵后到達檢測器,熒光的強度與樣品的濃度呈一定的比例,熒光檢測靈敏度高,可實時檢測,使用方便,檢測模式多樣,但是容易受外界干擾,激發(fā)光與發(fā)射光容易互相影響,干擾檢測。

③化學發(fā)光酶標儀:是來自生物化學反應中的自發(fā)光,可分為輝光型和閃光型兩種類型,輝光型發(fā)光持久,穩(wěn)定,能持續(xù)一段時間;閃光型發(fā)光時間短,變化快,穩(wěn)定性不強,需要應用自動加樣器才可以進行,化學發(fā)光中發(fā)出的光子數(shù)與樣品量呈一定比例關(guān)系,化學發(fā)光酶標儀靈敏度非常高,動力學范圍廣。

④多功能酶標儀:以上三種酶標儀的集合,它集成了兩種或者三種酶標儀于一體,可以同時進行光吸收,熒光和化學發(fā)光的檢測,功能強大,使用范圍廣,可作為研究平臺,避免了重復購買,是實驗室的首選,另外根據(jù)通道的個數(shù),可以將酶標儀分為單通道和多通道兩種類型,單通道又有自動和手動兩種之分。

二、酶標儀常見應用

光吸收常見應用

1.DNA/RNA含量測定常用于快速檢測質(zhì)粒DNA濃度。

2.ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)檢測方法多(間接法、競爭法、雙抗夾心法等)。

3.細胞活力檢測MTT\XTT等酶活動力學檢測。

※光吸收法優(yōu)缺點

1.優(yōu)點:靈敏、特異性、簡單、快速、對環(huán)境沒污染、穩(wěn)定易于自動化操作等。

2.不足:降低靈敏度(針對新方法其易受到雜質(zhì)干擾)、動態(tài)范圍比較窄(3數(shù)量級),步驟繁瑣(清洗步驟多)。

化學發(fā)光檢測

1.單/雙熒光素酶報告基因、BRET。

2.細胞活力檢測、細胞增殖檢測、支原體檢測、細胞毒性檢測、ATP、dsDNA、水母發(fā)光蛋白Ca2+。

3.基于化學發(fā)光的ELISA檢測等。

熒光檢測

1.生物大分子(DNA/RNA或蛋白質(zhì))。

2.免疫熒光(熒光標記物,如GFP\YFP\CFP等)。

3.細胞學分析(細胞增殖、細胞毒理、細胞遷移、細胞吸附、細胞滲透)。

4.線粒體膜電位分析。

5.鈣流檢測。

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