背景[1-7]
外泌體膜標(biāo)記熒光試劑盒是利用被熒光標(biāo)記的親脂性的染料和膜滲透型的化合物對對分離的外泌體進(jìn)行體外標(biāo)記或活體示蹤的科研試劑盒。Exosome（外泌體）是由活細(xì)胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)；參與細(xì)胞之間的交流，物質(zhì)的運(yùn)輸以及正常生理過程的維持，此外還與疾病的產(chǎn)生有關(guān)。
外泌體膜標(biāo)記熒光試劑盒根究標(biāo)記物染色方法有以下幾種：
1. 親脂性染料:PKH-67（green）/PKH-26（red）
染料可以穩(wěn)定的與細(xì)胞膜脂質(zhì)區(qū)結(jié)合并發(fā)出熒光，主要用于細(xì)胞體外標(biāo)記、體外細(xì)胞增殖研究以及體內(nèi)外的細(xì)胞失蹤研究。PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更長的半衰期，標(biāo)記在兔紅細(xì)胞上的PKH26半衰期長達(dá)100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長期的體內(nèi)細(xì)胞跟蹤研究。
2. 親脂性羰花青染料（carbocyanine dyes）:DiI/DiD/DiO/DiR
DiI,DiO,DiD,DiR是一系列親脂性的熒光染料，可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。這些環(huán)境敏感性熒光染料在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)。且具有消光系數(shù)高、極性依賴性、激發(fā)態(tài)壽命短等特點(diǎn)。一旦進(jìn)入細(xì)胞膜后，可在整個(gè)細(xì)胞膜上擴(kuò)散，濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。
外泌體膜標(biāo)記熒光試劑盒根究標(biāo)記方法有以下幾種：
1.CFSE：
羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯，常稱為CFSE，可被動(dòng)擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞。這種試劑沒有顏色和熒光，直至細(xì)胞內(nèi)的酯酶去除其醋酸鹽基團(tuán)，產(chǎn)生能發(fā)出明亮熒光的羧基熒光素琥珀酰亞胺酯。琥珀酰亞胺酯與細(xì)胞內(nèi)氨基反應(yīng)，形成穩(wěn)定且能用醛固定劑固定的熒光偶聯(lián)物。
2.Calcein-AM：
在傳統(tǒng)的Calcein（鈣黃綠素）基礎(chǔ)上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基團(tuán)，增加了疏水性，使其能夠輕易穿透活細(xì)胞膜。一旦進(jìn)入細(xì)胞后，Calcein-AM（本身不發(fā)熒光）被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子Calcein，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)并發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。
3.利用外泌體表面的巰基（thiol group）對外泌體進(jìn)行標(biāo)記
應(yīng)用[8]
外泌體膜標(biāo)記熒光試劑盒僅限在用于外泌體相關(guān)的科研研究:
在血漿外泌體源性miR-122-5p和miR-300-3p作為診斷大鼠短暫性腦缺血發(fā)作潛在標(biāo)記物的研究中以血漿外泌體源性rno-miR-122-5p和rno-miR-300-3p在大鼠短暫性腦缺血發(fā)作的標(biāo)記物。用外泌體膜標(biāo)記熒光試劑盒對大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞模型中的血漿外泌體源性miR-122-5p和miR-300-3p進(jìn)行檢測。
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