背景^[1-3]

人口腔鱗癌細胞是一種常用于研究和治療口腔癌的細胞。

人口腔鱗癌細胞是從口腔鱗狀細胞癌患者體內分離出來的細胞，具有腫瘤細胞的特性，如快速增殖、侵襲和轉移等。這些細胞被廣泛用于研究口腔癌的生物學特征、藥物篩選和腫瘤治療等。

人口腔鱗癌細胞可以用于制作口腔癌細胞系，用于研究口腔癌的發(fā)生、發(fā)展機制，以及探索新的治療手段。通過研究這些細胞在體外和體內的行為，可以幫助科學家們更好地理解口腔癌的生物學特征，以及開發(fā)更有效的治療策略。

此外，人口腔鱗癌細胞還可以用于制作腫瘤模型，以模擬人類口腔癌的生長和轉移。這些模型對于研究腫瘤的生物學、測試藥物療效以及研究腫瘤與宿主之間的相互作用都具有重要的意義。

人口腔鱗癌細胞

人口腔鱗癌細胞培養(yǎng)步驟：

一．人口腔鱗癌細胞培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,添加NaHCO3 1.5g/L,D-葡萄糖2.5g/L,丙酮酸鈉0.11g/L)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）人口腔鱗癌細胞培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）人口腔鱗癌細胞凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二．人口腔鱗癌細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2）人口腔鱗癌細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）人口腔鱗癌細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

應用^[4][5]

人口腔鱗癌細胞可以用于PGRN對口腔鱗癌細胞增殖、遷移、侵襲的影響

通過增強或抑制顆粒蛋白前體的表達來闡明其對人口腔鱗狀細胞癌細胞的增殖、遷移、侵襲等生物學行為的影響,以從體外探究PGRN在口腔鱗狀細胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

研究方法:1、敲減及過表達PGRN穩(wěn)定轉染細胞系的構建:構建包含PGRN干擾序列及包含PGRN全長序列慢病毒載體,分別對口腔鱗癌細胞CAL27、SCC15進行轉染,分組為:敲減組(shPGRN)、敲減對照組(shNC)、過表達組(oePGRN)、過表達對照組(oeNC);real-time PCR驗證敲低PGRN及過表達PGRN的效果。

2、敲減及過表達PGRN對細胞增殖、遷移、侵襲的影響:通過CCK-8法及平板克隆形成實驗檢測敲減及過表達PGRN對細胞生長及增殖的影響;通過Transwell遷移實驗及劃痕實驗確定敲減及過表達PGRN對細胞遷移的影響;通過Transwell基底膜侵襲實驗確定敲減及過表達PGRN對細胞侵襲的影響。

3、利用免疫組化方法檢測12例口腔鱗癌患者癌及癌旁組織中PGRN的表達情況是否存在差異。

結果:1、免疫組織化學結果顯示PGRN在口腔鱗癌中較癌旁表達上調。

2、通過real-time PCR從基因水平驗證構建成功敲減及過表達PGRN的口腔鱗癌細胞系,并篩選出干擾序列LV-GRN-RNAi21856-1、LV-GRN-RNAi21857-1效果更佳,慢病毒轉染時感染復數(shù)(MOI)為5。

3、在口腔鱗癌細胞系CAL27、SCC15中敲低PGRN后,與對照組相比生長明顯減慢,克隆形成實驗顯示集落形成減少。遷移實驗表明細胞遷移能力明顯下降。Transwell實驗表明能穿過小室及基質膠的細胞數(shù)明顯減少。

4、在口腔鱗癌細胞系CAL27、SCC15中過表達PGRN后,與對照組相比生長明顯增快,克隆形成實驗顯示集落形成增多。遷移實驗表明細胞遷移能力明顯上升。Transwell實驗表明能穿過小室及基質膠的細胞數(shù)明顯增多。

結論:PGRN可增強口腔鱗癌細胞(CAL27、SCC15)的生長增殖、遷移和侵襲能力,對口腔鱗癌的發(fā)生發(fā)展起促進作用。

參考文獻

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