背景及概述[1][2]
倍硫磷又名百治屠 (tiguvon)。廣譜、低毒有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑。殺蟲(chóng)作用比敵百蟲(chóng)強(qiáng),對(duì)人、畜毒性較低,無(wú)蓄積作用,性質(zhì)穩(wěn)定,維持藥效長(zhǎng)。是殺滅牛皮蠅蚴的特效藥,對(duì)移行期第二期蚴蟲(chóng)也有效,但蚴蟲(chóng)移行至脊髓階段要避免用藥,否則會(huì)引起癱瘓。亦用于殺滅虱、蜱、蠅等。用噴淋或背部澆潑等方法給藥。
純品為無(wú)色油狀液體,工業(yè)品為黃棕色油狀液體。商品為50%乳劑,具蒜臭味。對(duì)光、熱、堿較穩(wěn)定,可與弱堿性農(nóng)藥混用,但應(yīng)隨配隨用。具觸殺、胃毒作用,并稍具內(nèi)吸作用,殘效期較長(zhǎng)。對(duì)高等動(dòng)物的毒性中等,對(duì)大白鼠的口服致死中量為216mg/kg。每畝用50%乳劑100~150g(稀釋800~1000倍)對(duì)茶葉象甲和綠鱗象甲有較好防治效果。安全間隔期暫定為10~15天。
檢測(cè)[3]
倍硫磷(Fenthion)屬有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑,結(jié)構(gòu)為毒性中等,殺 蟲(chóng)譜寬,殘效期長(zhǎng),使用廣泛。倍硫磷殘留對(duì)人、畜等具有一定危害性,倍硫磷的大量推廣使用,必然會(huì)給環(huán)境衛(wèi)生和農(nóng)產(chǎn)品安全帶來(lái)危害。因此世界各國(guó)都對(duì)倍硫磷在農(nóng)產(chǎn)品中的允許殘留量作了嚴(yán)格地規(guī)定,我國(guó)也不例外。目前倍硫磷檢測(cè)方法主要是傳統(tǒng)的色譜法,該方法對(duì)機(jī)器依賴性強(qiáng),成本高,操作復(fù)雜,分析時(shí)間長(zhǎng),難以滿足高通量、快速、在線檢測(cè)的要求。
CN200710021377.5針對(duì)現(xiàn)有色譜儀器技術(shù)中的倍硫磷檢測(cè)方法操作較復(fù)雜、檢測(cè)費(fèi)用較高、檢測(cè)效率低下的缺陷,提供倍硫磷ELISA檢測(cè)方法,為倍硫磷農(nóng)藥殘留找到一種既快速準(zhǔn)確又簡(jiǎn)單低廉的超微量檢測(cè)方法。對(duì)倍硫磷農(nóng)藥的殘留量進(jìn)行檢測(cè),準(zhǔn)確度高、靈敏度高、簡(jiǎn)單、快速、低廉。檢測(cè)方法包括:
(1)倍硫磷多克隆抗體制備
采用倍硫磷人工抗原的免疫原“倍硫磷-牛血清白蛋白偶聯(lián)物”,常規(guī)免疫方 法免疫新西蘭白兔,制備得到地抗倍硫磷的兔抗血清即為倍硫磷多克隆抗體;
(2)包被
采用倍硫磷人工抗原的包被抗原“倍硫磷-卵清蛋白偶聯(lián)物”1.2μg/mL在微 量分析板中每孔加50μL,4℃冰箱過(guò)夜,倒凈,以常規(guī)洗滌緩沖液磷酸鹽-吐溫緩 沖液洗滌3~6次并倒置、在吸水紙上拍干;
(3)封閉
1%明膠作封閉物,微量分析板每孔100μL,37℃反應(yīng)1小時(shí),倒凈,以常規(guī) 洗滌緩沖液磷酸鹽-吐溫緩沖液洗滌3~6次并倒置、在吸水紙上拍干;
(4)加抗體及抗體與待測(cè)樣品的混合液
用稀釋8000倍的倍硫磷抗血清與待測(cè)樣品和空白抗原抗體反應(yīng)溶液即常規(guī) 磷酸鹽-吐溫緩沖液等體積充分混合,后以每孔50μL加到微量分析板中,37℃反 應(yīng)1小時(shí),倒凈,以常規(guī)洗滌緩沖液磷酸鹽-吐溫緩沖液洗滌3~6次并倒置、在 吸水紙上拍干;
(5)加酶標(biāo)二抗
用pH7.4、0.15mol/L的常規(guī)洗滌緩沖液磷酸鹽-吐溫緩沖液將商品化的HRP- 羊抗兔IgG稀釋2000倍,微量分析板每孔加50μL,37℃反應(yīng)1小時(shí),倒凈,以 常規(guī)洗滌緩沖液磷酸鹽-吐溫緩沖液洗滌3~6次并倒置、在吸水紙上拍干;
(6)顯色
微量分析板每孔加50μL的四甲基聯(lián)苯胺底物溶液,37℃顯色反應(yīng)10分鐘
(7)終止反應(yīng)并讀數(shù)
加2mol/L的硫酸,微量分析板每孔加25μL,終止顯色反應(yīng),酶聯(lián)儀上450nm 處讀出吸光值,空白基質(zhì)作陽(yáng)性對(duì)照吸光值Bo,待測(cè)樣品吸光值B;
(8)數(shù)據(jù)處理
計(jì)算出結(jié)合率B/Bo及Logit(B/Bo),
Logit(B/Bo)=Ln[(B/Bo)/(1-B/Bo)] 公式1
代入如下檢測(cè)方程:
Logit(B/Bo)=-0.7575LogC-1.4928 公式2
其中C為微量分析板孔中測(cè)得的倍硫磷濃度,通過(guò)公式1和公式2可以求得;
X=n×2C,n為反應(yīng)前樣品被稀釋的倍數(shù) 公式3
待測(cè)樣品中以濃度X表示的倍硫磷殘留量可通過(guò)公式3求得。
上述倍硫磷農(nóng)藥殘留量ELISA檢測(cè)方法中,抗原抗體反應(yīng)液磷酸鹽-吐溫緩沖 液中甲醇含量為5%、pH值為7.4、離子強(qiáng)度為0.15mol/L,微量分析板中每孔50μL。公式2可由倍硫磷系列標(biāo)準(zhǔn)濃度的競(jìng)爭(zhēng)曲線進(jìn)行校正。
應(yīng)用[2]
為廣譜低毒有機(jī)磷殺蟲(chóng)藥,是防治畜禽外寄生蟲(chóng)病的主要藥物。通過(guò)觸殺和胃毒作用方式進(jìn)入蟲(chóng)體,殺滅宿主體內(nèi)外寄生蟲(chóng)。殺滅作用比敵百蟲(chóng)強(qiáng)5倍。除了對(duì)馬胃蠅蚴、家畜胃腸道線蟲(chóng)以及虱、蜱、蚤、蚊、蠅等有殺滅作用外,對(duì)牛皮蠅蚴有特效(無(wú)論是第三期蚴,還是第二期蚴),在牛皮蠅產(chǎn)卵期使用,可取得良好的效果。
由于性質(zhì)穩(wěn)定,一次用藥可維持藥效2個(gè)月左右。對(duì)人、畜的毒性較低,大鼠內(nèi)服LD50為177~375mg/kg,皮下注射為345~410mg/kg。在體內(nèi)無(wú)蓄積作用,給乳牛用藥后,奶中殘留量極低,可用于乳牛,但應(yīng)在用藥6小時(shí)后再行擠奶。用于殺滅牛皮蠅蚴,除對(duì)一般藥物有效的第三期蠅蚴有效外,對(duì)移行期蠅幼也有效;殺滅家畜體表虱、蜱、蚤、蚊、蠅等。
主要參考資料
[1] 中國(guó)茶學(xué)辭典
[2] 新編獸藥實(shí)用手冊(cè)
[3] CN200710021377.5 農(nóng)藥倍硫磷殘留免疫檢測(cè)方法