背景^[1]

Recombinant Rat IFN-γ是細(xì)胞和機(jī)體在收到病毒侵染的時候分泌的一種具有廣譜抗病毒作用的糖蛋白。由淋巴細(xì)胞分泌，主要參與分泌主要組織相容性抗原（MHC）的表達(dá)和免疫調(diào)節(jié)。已有文獻(xiàn)指出，Recombinant Rat IFN-γ與Recombinant Rat TNF-α相互作用能夠改變腸道的上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和屏障功能，使得腸粘膜的通氣性增加。在許多腸道炎癥中，Recombinant Rat IFN-γ的表達(dá)增加。

在衣原體感染中的作用^[2]

Recombinant Rat IFN-γ生物活性十分廣泛，在免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮重要作用。鼠生殖道感染鼠衣原體的動物模型顯示，細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)是宿主抵抗衣原體感染的主要免疫機(jī)制，而Recombinant Rat IFN-γ是清除衣原體感染最主要的細(xì)胞因子。Recombinant Rat IFN-γ和Recombinant Rat IFN-γ受體基因缺陷的乳鼠感染鼠衣原體后易引起衣原體在體內(nèi)播散，2周內(nèi)病死率達(dá)100%。許多體外試驗已證明高濃度IFN-γ完全抑制衣原體生長；導(dǎo)致持續(xù)感染，使網(wǎng)狀體發(fā)生異變，發(fā)展成無感染性的非典型形態(tài)的RB，但仍有代謝活性。去除Recombinant Rat IFN-γ后，非典型形態(tài)的RB又能恢復(fù)原生長活性繼續(xù)以二分裂方式進(jìn)行分裂、繁殖，釋放具有感染性的原體（EB）。但不同的衣原體菌株對Recombinant Rat IFN-γ的敏感性不同，機(jī)體清除Ct呈IFN-γ依賴性，而清除鼠衣原體呈非IFN-γ依賴性。其他因素如宿主細(xì)胞極化狀態(tài)以及宿主遺傳背景也影響Recombinant Rat IFN-γ抗衣原體感染的敏感性。

基因克隆、測序及輻射誘導(dǎo)表達(dá)質(zhì)粒pIRESEgr-IFNγ的構(gòu)建^[3]

方法 :利用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng) (RT- PCR) 法 , 以小鼠脾細(xì)胞 m RNA為模板 , 擴(kuò)增獲得全長IFNγc DNA, 與 p GEMT載體連接做全自動測序 , 并利用基因重組技術(shù)構(gòu)建含 Egr- 1啟動子的輻射誘導(dǎo)表達(dá)質(zhì)粒p IRESEgr- IFNγ。

結(jié)果 :經(jīng)測序證實獲得的小鼠 IFNγ c DNA序列與文獻(xiàn)報道完全一致 , 并構(gòu)建了含 Egr- 1啟動子的輻射誘導(dǎo)表達(dá)質(zhì)粒 p IRESEgr- IFNγ。結(jié)論 :成功克隆了小鼠 IFNγ的 c DNA序列 , 構(gòu)建了輻射誘導(dǎo)表達(dá)質(zhì)粒p IRESEgr- IFNγ。

酶切鑒定

參考文獻(xiàn)

[1]  TNF-α、IFN-γ通過激活骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞NF-κB/STAT3通路調(diào)控DSS誘導(dǎo)小鼠腸炎的炎癥反應(yīng).李娟.廈門大學(xué)2014

[2]  γ干擾素抗衣原體感染作用的研究進(jìn)展,唐國芳，李忠玉，2009

[3]IFN-γ基因克隆、測序及輻射誘導(dǎo)表達(dá)質(zhì)粒pIRESEgr-IFNγ的構(gòu)建.劉林林,楊巍,2004