背景及概述

果糖-1，6-二磷酸（FDP）鈉鹽系細胞分子水平藥物，它具有改善細胞代謝，增加能量利用，加速組織修復，恢復正常功能，保護紅細胞韌性，以及維持紅細胞釋氧能力等功效。適應癥有：休克、心肌缺血及急性心肌梗塞，缺血性腦血管意外、麻醉意外、外周血管疾患、糖尿病血管病變、子宮內膜病變、外科復合傷及燒傷、體外循環(huán)及多次輸血中的輔助治療，以及外科胃腸外營養(yǎng)療法等，因此具有廣泛的臨床藥用前景。果糖二磷酸鈉性狀圖如下：

圖1 果糖二磷酸鈉性狀圖

制備

以蔗糖、磷酸鹽為原料加入新鮮酵母或干酵母發(fā)酵制備CaFDP、BaFDP，再從CaFDP或BaFDP經馬錢子堿純化得到FDP。華東理工大學、常州生化藥廠以蔗糖為原料加啤酒酵母發(fā)酵制備NaFDP。我們用商品面包酵母發(fā)酵法生產藥用FDP，原料以市售面包酵母和淀粉為主，方法簡易、成本低廉，產率為10.5％。本工作為我國進行藥用FDP的商業(yè)化生產打下了基礎[1]。

粗FDP的制備

稱取2kg淀粉，咖入適量的磷酸鹽及20kg水配成溶液，再加入干酵母，把混合物攪勻，至恒溫水浴發(fā)酵，4h后，加入10％辛醇-酒精溶劑以終止發(fā)酵，隨即在沸水浴加熱10min，使蛋白質凝固沉淀，離心15min，收集上清液，粗FDP游離存在于上清液中。

制備FDP鋇鹽

發(fā)酵液離心后得到的上清液加入鋇鹽溶液，出現白色沉淀，抽濾，用熱水洗滌2次，得BaFDP粗品750g。

制備FDP鈣鹽

方法與2.1.2類似，用無水CaCl2代替鋇鹽得CaFDP粗品224g。

FDP鋇鹽到鈉鹽的轉化

750gBaFDP懸浮液加入鈉鹽溶液，攪拌，過濾除去BaSO4沉淀，加入乙醇后置冰箱1.5h，抽濾，得白色NaFDP粗品，反復用無水乙醇沉淀，以去掉鹽份，重結晶數次，最后得NaFDP精制品，自然干燥后稱重得210g。

FDP鈣鹽到鈉鹽的轉化

112gFDP鈣鹽懸浮液，加入鈉鹽，振搖，抽濾得濾液150ml，加入酒精沉淀，冰箱放置1.5h，抽濾，得NaFDP粗品，反復溶解后用無水乙醇沉淀，去掉鹽分，得產品NaFDP41.5g。

分析

HF254熒光薄層層析

取5×15cm的玻璃板一塊，取1g硅膠HF254，放在研缽中加入適量的羧甲纖維素鈉溶液，加入4－5滴95％乙醇（消泡用）研磨數分鐘，研好的勻漿倒在玻璃板上，使其分布均勻，自然干燥后置105℃烘箱中活化30min。然后點樣并展層，所用展開劑為乙酸乙酯∶甲醇∶乙酸∶水＝12∶3∶3∶2在層析缸中采用傾斜上行法展層，展開劑距離薄層板上端2cm時取出，放于40℃烘箱中烘干，在紫外燈下熒光顯示。

比旋度的測定

分別配制濃度為10mg／ml的產品溶液和標準樣品溶液，用全自動旋光儀測定旋光度，計算比旋光度，產品和標準樣品各測三次，取平均值。

產品純度測定采用酶法測定。取一定量的FDP標準液加兔肌醛縮酶和α-磷酸甘油醛脫氫酶，NADH，在340nm處測定光吸收的減少，作標準曲線。另取一定量的產品按上述方法測定，在標準曲線上查出產品中FDP的實際含量。

1, 6-二磷酸果糖鈉鹽結晶新工藝研究

(1)酒精-醋酸鈉體系結晶FDP與酒精-低溫體系結晶FDP相比，由于降低了溶液的粘度及過飽和度，改善了溶液的傳質狀況，通過控制成核速率和晶體的生長速率，從而控制晶體的大小，提高晶體顆粒的均一性。另外由于同離子效應的作用，醋酸鈉的加入，增加了溶液的化學勢，縮短了誘導期的時間。

(2)pH值和溫度對晶體粒度分布的影響較大。如溶液的pH值從4.5增加到5.2相差0.7，而晶體的平均粒度差異卻達84μm，又如結晶溫度從20℃增加到30℃，而晶體顆粒卻從92μm增加到241μm，因此可以通過控制溶液的pH值和結晶溫度控制晶體顆粒大小。

總之利用本工藝結晶FDP不但可以縮短結晶時間，提高產品收率，而且可以控制產品的均一性和顆粒大小，從而提高產品的質量和穩(wěn)定性。關于1，6-二磷酸果糖鈉鹽結晶時的相變、成核機理和結晶動力學還有待進一步的研究。

討論

本文介紹了從游離的FDP制備NaFDP的兩條途徑：

（1）從游離的FDP合成CaFDP，再由它轉化成NaFDP；

（2）從游離的FDP中和成BaFDP，再由它轉化成NaFDP。

在條途徑中，CaFDP的顆粒較大，沉淀疏松，易吸附大量水分和鹽，使轉化效率低，雜質帶入多，而導致通過條途徑所得的NaFDP的量很少，產率低，不適于生產應用。而BaFDP的顆粒細，沉淀緊密，可以通過抽濾，洗去大量鹽類和雜質，且BaSO4沉淀完全，使之有較高的轉化效率，雜質少，易純化，產品得率10.5％。薄層層析、比旋光度測定是定性的依據，兔肌醛縮酶只專一性地作用于FDP，所以是定量分析，NMR是化學結構分析，從1HNMR顯示，樣品與標準品波譜相同。又從13CNMR顯示其樣品與標準品波譜相同，因13C波譜與C骨架直接相連的原子化學環(huán)境有關，超過二鍵以上的基團影響C線的化學位移在圖上沒有影響，所以樣品與標準品主結構完全一致。以上分析證實確系果糖-1，6-二磷酸，HPLC分析既是定性又是定量分析，根據提供的測試結果。

本文用高壓液相色譜（HPLC）、核磁共振氫譜（1HNMR）、核磁共振碳譜（13CNMR）來檢測FDP結構，這在國內外未見報導。因此，我們?yōu)镕DP結構的檢測提供了一系列新的方法。本工藝簡單，產品得率高，質量好，且原料價格低廉，取材方便，經濟效益顯著。

參考文獻

[1] 應漢杰. 1, 6-二磷酸果糖制備新技術的研究 [博士論文].南京化工大學 , 1998