背景及概述^[1][2]

弗氏不完全佐劑是一種同抗原一起或預先注入機體，能增強免疫原性，或改變免疫反應類型的物質(zhì)。佐劑的種類很多，有氫氧化鋁、甲基纖維素、百日咳菌苗等，以弗氏佐劑最為常用。礦物油 (石臘油)、乳化劑(羊毛脂)組成的油包水型乳化佐劑，即為弗氏不完全佐劑。

應用 ^[2]

弗氏不完全佐劑可與其他佐劑一起制成混合佐劑用于單克隆抗體的制備，往小鼠腹腔內(nèi)注射該混合佐劑能夠提高小鼠腹水產(chǎn)量。CN201810207423.9提供了這種混合佐劑，包括氫氧化鋁和弗氏不完全佐劑，所述氫氧化鋁和弗氏不完全佐劑的質(zhì)量體積比為0.8-1.2mg/ml。還包括白細胞介素，所述白細胞介素和弗氏不完全佐劑的質(zhì)量比為0.05-0.15∶1。本混合佐劑的制備方法，包括如下步驟：步驟1：按照氫氧化鋁和弗氏不完全佐劑的質(zhì)量體積比為0.8-1.2mg/ml，白細胞介素和弗氏不完全佐劑的質(zhì)量比為0.05-0.15∶1進行備料；步驟2：先將氫氧化鋁和弗氏不完全佐劑進行混合均勻，再加入白細胞介素進行混合均勻。上述含有弗氏不完全佐劑、氫氧化鋁和白細胞介素的混合佐劑在單克隆抗體的制備過程中能夠提升小鼠腹水產(chǎn)量，從而提升單克隆抗體產(chǎn)量。本混合佐劑具有以下有益效果：含有弗氏不完全佐劑、氫氧化鋁和白細胞介素的混合佐劑在單克隆抗體的制備過程中能夠提升小鼠腹水產(chǎn)量，從而提升單克隆抗體產(chǎn)量。

制備方法 ^[2]

弗氏佐劑是現(xiàn)在動物實驗中最常用的佐劑，分為不完全弗氏佐劑和完全弗氏佐劑。不完全弗氏佐劑是液體石蠟與羊毛脂混合而成，組分比為1～5：1，可根據(jù)需要而定，通常為2：1。不完全佐劑中加卡介苗(最終濃度為2～20mg/ml)或死的結(jié)核分枝桿菌，即為完全弗氏佐劑（FCA）。一般首次注射時用1／2體積FCA加上1／2體積的抗原進行乳化，第二次或第三次注射時用不完全佐劑或不用佐劑。如不加佐劑，則抗原量增大10-20倍。
配制方法：按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內(nèi)，用超聲波使之混勻，高壓滅菌，置4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

在免疫動物前，先將弗氏佐劑與抗原按一定比例混合，佐劑和抗原體積比一般為1：1，制備成"油包水"乳狀液。因為含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化復合物，注射入動物體內(nèi)時一定要保持乳化狀態(tài)?？乖昧恳暱乖肿恿坎煌懊庖咴约懊庖邉游锊煌幸欢ú町?，無統(tǒng)一標準和固定模式。一般是每兔（約2kg重）或每羊（約20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，最多每次不超過3mg。
佐劑與抗原乳化可按如下方法進行：

（1）研磨法：先將佐劑加熱并取適量放入無菌的玻璃研缽內(nèi)，待冷卻后再緩緩滴入等體積的抗原溶液，邊滴邊按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后，繼續(xù)研磨一段時間，使之成為乳白色粘稠的油包水乳劑。本法適于制備大量的佐劑抗原，缺點是研缽壁上粘附大量乳劑，抗原損失較大。

（2）注射器混合法：將等量的弗氏佐劑和抗原溶液分別吸入兩個注射器內(nèi)，兩注射器之間以一細膠管相連，注意排凈空氣，然后交替推動針管，直至形成粘稠的乳劑為止。本法優(yōu)點是容易做到無菌操作，抗原損失少，適用于制備少量的抗原乳劑。但同時難以乳化完全，個別抗原，用塑料注射器根本推不動，而用玻璃注射器又有滲漏。制備好的乳化劑經(jīng)鑒定才能適用。鑒定方法是將乳化劑滴入冷水中，若保持完整不分散，成滴狀浮于水面，即乳化完全，為合格的油包水劑。

（3）超聲：實驗室條件好點的，比如說有超聲破碎儀的，一定要控制超聲頻率和時間，超聲容易激發(fā)一些自由基，對抗原有未知損害。乳化方法要根據(jù)抗原和需要而定。

主要參考資料

[1] 臨床醫(yī)學多用辭典

[2]CN201810207423.9佐劑及其制備方法和應用