樣品首先被蛋白酶K消化,隨后加入適合DNA結(jié)合到純化柱上的緩沖液,然后加入到純化柱內(nèi)。通過高速離心,使DNA在穿過純化柱的瞬間,結(jié)合到純化柱上,隨后通過兩次洗滌去除各種雜質(zhì),最后通過洗脫液把DNA洗脫下來。整個過程無需酚氯仿抽提,無需酒精沉淀,樣品裂解后僅需約15分鐘即可完成。通過本試劑盒純化得到的基因組DNA的長度最長可達50kb左右,平均為30kb左右,最短為100bp的DNA也可以被純化。如需獲得更長的基因組DNA,對于哺乳動物樣品,包括組織或細胞等,可以使用哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒。通過本試劑盒獲得的總DNA,OD260/OD280的范圍通常在1.7至1.9之間。本試劑盒可以抽提少至數(shù)百個細胞,多至25mg組織、0.5-1cm鼠尾、500萬個培養(yǎng)細胞、20億個細菌或5000萬個酵母。樣品用量過多,反而會影響抽提效果。如果待抽提樣品的DNA含量小于5ng,建議加入適當量的carrier DNA,例如poly-dT或其它對后續(xù)實驗沒有干擾的DNA,也可以加入適當量的carrier RNA,例如yeast RNA等,以改善抽提效果。本試劑盒的標準操作步驟抽提得到的總DNA會含有少量RNA,但如果按照可選步驟加入RNase A,就可以獲得不含RNA的高純度總DNA。含有RNA的總DNA可以用于PCR,但對于某些其它的后續(xù)反應(yīng)可能會產(chǎn)生一些影響。純化柱對于DNA的容量約為30微克。通常每200萬Hela細胞或500萬淋巴細胞可以抽提得到15-25微克總DNA,每25mg肝、腦、腎組織可以抽提得到10-30微克總DNA,每25毫克心、肺組織可以抽提得到5-10微克總DNA,每10mg脾組織可以抽提得到5-30微克總DNA,每1.2cm小鼠尾尖或0.3cm大鼠尾尖可以獲得10-25微克總DNA。
本試劑盒可以抽提50個樣品的總DNA。
包裝清單:
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
D0063-1 | 樣品裂解液A | 10ml |
D0063-2 | 樣品裂解液B | 11ml |
D0063-3 | 洗滌液I | 21ml (次使用前加入7ml無水乙醇) |
D0063-4 | 洗滌液II | 16ml (次使用前加入24ml無水乙醇) |
D0063-5 | 洗脫液 | 22ml |
D0063-6 | 蛋白酶K | 1.1ml |
D0063-7 | DNA純化柱及廢液收集管 | 50套 |
— | 說明書 | 1份 |
保存條件:
蛋白酶K-20℃保存,其余均室溫保存。一年有效。蛋白酶K室溫(15-25℃)存放一周,活力無明顯下降。注意事項:抽提細菌、酵母樣品時還需要一些特定的試劑,詳情請參考相關(guān)實驗步驟。如需制備不含RNA的高純度總DNA,需自備RNase A。溫度較低時樣品裂解液A或樣品裂解液B中可能會有沉淀產(chǎn)生,屬正?,F(xiàn)象。使用前必須檢查一遍。如有沉淀,55℃水浴孵育使沉淀溶解,混勻后使用。次使用前洗滌液I需添加7ml無水乙醇,洗滌液II需添加24ml無水乙醇,混勻,并在瓶上做好標記。本試劑盒需使用55℃水浴,請?zhí)崆白骱脺蕚?。除特別說明外,每次Vortex應(yīng)控制在5-10秒左右。本試劑盒所有操作均在室溫進行,操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進行。廢液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丟棄。參考如下使用說明,從某些樣品中抽提總DNA不需要使用樣品裂解液A。本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。