背景[1-3]
基因組DNA提取試劑盒是根據(jù)氯化芐法構建的，能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。氯化芐具有能將含有纖維素等的細胞壁中的羥基芐基化，從而破壞細胞壁的特性。試劑盒利用了氯化芐的這一特性，將植物樣品凍結融解后，再使用Pipet Tip的尖端將植物樣品在Microtube壁上數(shù)次按壓即可破壞細胞壁。本法與傳統(tǒng)方法相比，省去了液氮研磨等煩瑣步驟，有利于一次性處理大量樣品。而且，本制品經(jīng)過了改良，熱處理時間只需15分鐘，使用試劑盒從實驗開始至水相回收只需30分鐘時間。
得到的基因組DNA可以進行PCR擴增及限制酶處理等。劑盒純化得到的基因組DNA的長度最長可達50kb左右，平均為30kb左右，最短為100bp的DNA也可以被純化。如需獲得更長的基因組DNA，對于哺乳動物樣品，包括組織或細胞等，可以使用哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒。通過試劑盒獲得的總DNA，OD260/OD280的范圍通常在1.7至1.9之間。
DNA提取試劑盒主要可以分為以下幾大類：小量全血基因組DNA提取試劑盒、中量全血基因組DNA提取試劑盒、組織/細胞基因組DNA提取試劑盒、中量/大量組織/細胞基因組DNA提取試劑盒、全血/組織/細胞基因組DNA提取試劑盒、CTAB植物基因DNA提取試劑盒、新型植物基因組DNA提取試劑盒、酵母基因組DNA提取試劑盒、M13噬菌體單鏈基因組DNA提取試劑盒。
應用[4][5]
用于環(huán)介導等溫擴增（LAMP）技術檢測旋毛蟲DNA的研究
通過建立高、中、低3種不同劑量旋毛蟲感染小鼠模型,收集感染早期階段的肌肉、血液、糞便樣本進行LAMP檢測,驗證了該方法的高度敏感性和特異性,特別是對于肌肉中幼蟲密度非常低時,該技術更突顯其重要的檢測和診斷價值。
研究證明LAMP法比PCR法更敏感、快速、簡便,有望在提高人及動物旋毛蟲病的早期診斷,旋毛蟲病的現(xiàn)場檢測、肉類檢疫及流行病學調(diào)查等領域發(fā)揮更大作用。材料和方法：旋毛蟲蟲種、實驗動物、基因組DNA的提取本實驗所用的蟲種,旋毛蟲河南豬源株(Trichinella spiralis,T1),北方旋毛蟲(T.nativa,T2)、偽旋毛蟲(T.pseudospiralis,T4)、南方旋毛蟲(納氏旋毛蟲,T.nelsoni,T7),來自國際旋毛蟲參考中心(International Trichinella Reference Centre,ITRC)本實驗室昆明小鼠傳代保種。
其他人體寄生蠕蟲標本,包括似蚓蛔線蟲、蟯蟲、鞭蟲、十二指腸鉤口線蟲、華支睪吸蟲、布氏姜片蟲、日本血蟲、豬帶絳蟲、牛帶絳蟲、曼氏迭宮絳蟲,均由本實驗室保存。
6w齡健康雄性昆明小鼠(SPF級),體重20g~25g,購買并飼養(yǎng)于軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心。旋毛蟲及其他樣本基因組DNA的提取采用天根公司的血液/組織/糞便基因組DNA提取試劑盒。
參考文獻
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[3]Differential detection of Trichinella papuae,T.spiralis and T.pseudospiralis by real-time fluorescence resonance energy transfer PCR and melting curve analysis[J].Chairat Tantrawatpan,Pewpan M.Intapan,Tongjit Thanchomnang,Viraphong Lulitanond,Thidarut Boonmars,Zhiliang Wu,Nimit Morakote,Wanchai Maleewong.Veterinary Parasitology.2011(2-4)
[4]Rapid genotyping of carcinogenic human papillomavirus by loop-mediated isothermal amplification using a new automated DNA test(Clinichip HPV?)[J].Toyomi Satoh,Koji Matsumoto,Takuma Fujii,Osamu Sato,Nobuhiro Gemma,Mamiko Onuki,Hiroshi Saito,Daisuke Aoki,Yasuo Hirai,Hiroyuki Yoshikawa.Journal of Virological Methods.2012
[5]李雪蓮.環(huán)介導等溫擴增（LAMP）技術檢測旋毛蟲DNA的研究[D].鄭州大學,2016.