背景[1-3]
兔抗豬IGG H&L(HRP)是以豬IGG H&L為抗原的HRP山羊多克隆抗體，可以特異性結(jié)合豬IGG H&L。兔抗豬IGG H&L(HRP)主要用于ICC/IF,Dotblot,ELISA,IHC-P,IHC-Fr,Immunomicroscopy,WB等豬IGG H&L檢測實(shí)驗(yàn)。
抗原與抗體能夠特異性結(jié)合是基于抗原決定簇（表位）和抗體超變區(qū)分子間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性與親和性。這種特性是由抗原、抗體分子空間構(gòu)型所決定的。除兩者分子構(gòu)型高度互補(bǔ)外，抗原表位和抗體超變區(qū)必須密切接觸，才有足夠的結(jié)合力。
B淋巴細(xì)胞在抗原刺激下轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，產(chǎn)生能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的抗體，稱為免疫球蛋白。免疫球蛋白G（IgG）是血清中免疫球蛋白的主成分，約占血清中免疫球蛋白總含量的75%。IgG有4個(gè)亞型，即IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。IgG是體內(nèi)最主要的抗體，具有抗病毒、中和病毒、抗菌及免疫調(diào)節(jié)的功能。
IgG也是唯一能夠通過胎盤的抗體，在新生兒抗感染中起重要作用。有些自身抗體，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡的LE因子，抗甲狀腺球蛋白抗體也屬于IgG。檢測血清中的IgG含量，最常用的方法是單向免疫擴(kuò)散法和免疫比濁法，但后者已逐漸代替前者。
檢測機(jī)體免疫球蛋白的含量可了解機(jī)體的體液免疫功能狀態(tài)，幫助診斷免疫增生、免疫缺陷、感染及自身免疫性等多種疾病，具有重要的臨床意義。
1.血清IgG增高：見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡、萎縮性門靜脈性肝硬變、慢性活動(dòng)性肝炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、IgG型骨髓瘤、某些感染性疾病、IgG型單克隆丙種球蛋白病等。
2.血清IgG減少：見于抗體缺乏癥、免疫缺陷綜合征、非IgG型多發(fā)性骨髓瘤、重鏈病、輕鏈病、腎病綜合征、某些白血病、燒傷、變應(yīng)性濕疹、天皰瘡、肌緊張性營養(yǎng)不良等。
應(yīng)用[4][5]
用于天然鼠源單鏈抗體庫的構(gòu)建及豬IgG的篩選
采用噬菌體抗體庫這一新興的生物學(xué)技術(shù),采用未經(jīng)免疫過的小鼠,取其脾細(xì)胞提取mRNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增出抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)基因,大小分別為360bp和320bp左右,純化回收的VH與VL在接近等摩爾濃度下,先采用含有Linker片段的引物將Linker片段連接到VL基因片段上去,然后與VH片段組裝成單鏈抗體基因(ScFv),再用帶有限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)的引物(5’端SfiI,3’端NotI)擴(kuò)增ScFv基因片段,獲得大小約750bp的目的片段,純化后分別用SfiI和NotI消化,與SfiI/NotI雙酶切的載體pCANTAB-5E連接,化學(xué)法轉(zhuǎn)化大腸桿菌TGI感受態(tài)細(xì)胞。
轉(zhuǎn)化菌經(jīng)輔助噬菌體M13K07挽救后,得到天然鼠源噬菌體抗體庫(Barbas et al,1993)。提取質(zhì)粒經(jīng)PCR初步鑒定,證明有外源片段插入且其大小與目的片段一致。
在成功構(gòu)建天然鼠源單鏈抗體庫的基礎(chǔ)上,以豬IgG為靶抗原對(duì)噬菌體抗體庫進(jìn)行了三輪“吸附-擴(kuò)增-洗脫”的富集過程,從而得到了豬IgG的次級(jí)噬菌體抗體庫。用富集后的庫液鋪板并挑取單菌落制備噬菌體抗體,進(jìn)行ELISA檢測,得到了預(yù)期的效果。
參考文獻(xiàn)
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