背景^[1-3]

羊抗豬IGG-HRP是以豬IGG-HRP為抗原的HRP羊多克隆抗體，可以特異性結(jié)合豬IGG-HRP。羊抗豬IGG-HRP主要用于ICC/IF,Dotblot,ELISA,IHC-P,IHC-Fr,Immunomicroscopy,WB等豬IGG-HRP檢測實(shí)驗(yàn)。

抗原與抗體能夠特異性結(jié)合是基于抗原決定簇（表位）和抗體超變區(qū)分子間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性與親和性。這種特性是由抗原、抗體分子空間構(gòu)型所決定的。除兩者分子構(gòu)型高度互補(bǔ)外，抗原表位和抗體超變區(qū)必須密切接觸，才有足夠的結(jié)合力。

抗原抗體反應(yīng)可分為兩個(gè)階段：階段為抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合的階段，此階段反應(yīng)快，僅需幾秒至幾分鐘，但不出現(xiàn)可見反應(yīng)；

第二階段為可見反應(yīng)階段，這一階段抗原抗體復(fù)合物在適當(dāng)溫度、pH、電解質(zhì)和補(bǔ)體影響下，出現(xiàn)沉淀、凝集、細(xì)胞溶解、補(bǔ)體結(jié)合介導(dǎo)的肉眼可見的反應(yīng)，此階段反應(yīng)慢，往往需要數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)。

免疫球蛋白G(IgG)是在脾臟和淋巴結(jié)中合成，在人體血清中的含量最高(占Ig量的75%)，而且在血清中半衰期長，主要分布在血清和組織液中，是抗細(xì)菌、抗毒素和抗病毒抗體的主要組成部分，也是機(jī)體抗感染免疫的過程中的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。由于IgG的含量最高，是人體免疫反應(yīng)的最重要的物質(zhì)基礎(chǔ)，而且它也是唯一能通過胎盤屏障的免疫球蛋白，對哺乳動物新生幼仔，新生兒抗感染起重要作用。

應(yīng)用^[4][5]

用于流行性乙型腦炎病毒E蛋白主要抗原域與豬IgG1-Fc片段在大腸桿菌中的融合表達(dá)及其應(yīng)用研究

利用E.coli原核表達(dá)系統(tǒng)對JEV主要結(jié)構(gòu)基因E蛋白基因和豬IgG1-Fc片段基因在大腸桿菌中進(jìn)行了融合表達(dá)，并利用表達(dá)產(chǎn)物初步建立了檢測JEV抗體的新型SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)，同時(shí)免疫BALB／c小鼠，評價(jià)融合蛋白E-pFc誘導(dǎo)BALB／c小鼠產(chǎn)生抗JEV特異性免疫效果。這為新型流行性乙型腦炎的血清診斷方法的建立和新型疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。

研究結(jié)果如下：1．根據(jù)GenBank公布的豬IgG1的核苷酸序列，設(shè)計(jì)一對引物，克隆豬IgG1-Fc域中包含部分CH2和完整CH3片段的基因。測序結(jié)果表明，RT-PCR產(chǎn)物大小為469bp，該片段的核苷酸序列與GenBank收錄的豬IgG1的核苷酸序列同源性為99.2％，與豬IgG2a、IgG2b、IgG3、IgG4核苷酸序列同源性分別為89.7％、89.7％、96.7％以及91.4％。從遺傳進(jìn)化樹中可以看出，擴(kuò)增片段與豬IgG1的遺傳距離最近，在同一分支上。這說明我擴(kuò)增的序列是豬IgG1亞型的。

2．該片段編碼的氨基酸序列的長度為120，與豬源IgG氨基酸序列同源性較高，為79.2％～98.3％，與其它動物IgG氨基酸序列同源性低于68.3％。從推導(dǎo)的氨基酸序列可以看出，該片段中含有兩個(gè)半胱氨酸Cys38和Cys98，這與設(shè)計(jì)一致。

3．通過Linker連接到表達(dá)載體pET-E中E基因的下游，即構(gòu)建成了重組表達(dá)質(zhì)粒pET-E-pFc，用酶切鑒定插入目的基因的正確性。將其轉(zhuǎn)化宿主菌BL21（DE3），經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)和超聲波裂解菌體后，運(yùn)用SDS-PAGE進(jìn)行可溶性分析，然后以His·Bind螯合層析柱和SPA親和層析柱兩種方法純化融合蛋白，SDS-PAGE、薄層凝膠掃描、Western Blotting和iELISA對該融合蛋白進(jìn)行了鑒定，并分析了兩種親和層析方法的純化效果。

參考文獻(xiàn)

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[3]A single gene controls resistance to Japanese encephalitis virus in mice[J].K.Miura,T.Onodera,A.Nishida,N.Goto,Y.Fujisaki.Archives of Virology.1990(3)

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[5]魏建超.流行性乙型腦炎病毒E蛋白主要抗原域與豬IgG_1-Fc片段在大腸桿菌中的融合表達(dá)及其應(yīng)用研究[D].南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2006.