背景^[1-3]

小鼠抗GAPDH單克隆抗體是一類可以特異性結(jié)合GAPDH的鼠源單克隆抗體，主要用于檢測GAPDH的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學實驗。

檢測原理：雙抗體夾心法測定標本中GAPDH水平。用純化的GAPDH抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入GAPDH，再與HRP標記的GAPDH抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的GAPDH呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中GAPDH濃度。

GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）的英文縮寫。GAPDH是糖酵解反應(yīng)中的一個酶，廣泛分布于各種組織中的細胞。

GAPDH（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）是參與糖酵解的一種關(guān)鍵酶，由4個30-40kDa的亞基組成，分子量146kDa，檢測條帶大約在36kDa。GAPDH基因幾乎在所有組織中都高水平表達，廣泛用作Western blot蛋白質(zhì)標準化的內(nèi)參。因為GAPDH作為管家基因在同種細胞或者組織中的蛋白質(zhì)表達量一般是恒定的，因此在使用GAPDH內(nèi)參抗體時，將每個樣品測得的目的蛋白含量與本樣品的GAPDH含量相除，得到每個樣品目的蛋白的相對含量，然后才進行樣品與樣品之間的比較。

應(yīng)用^[4][5]

用于海洋魚類細菌性病原微生物GAPDH蛋白的定位和功能初步研究

對海洋魚類病原微生物GAPDH蛋白的定位研究中,成功克隆了六種病原菌GAPDH編碼基因,并實現(xiàn)了六個基因在大腸桿菌中的重組表達；進一步制備了遲鈍愛德華氏菌EIB202重組蛋白GAPDH的多克隆抗體；在此基礎(chǔ)上通過Western blotting、間接免疫熒光觀察、流式細胞儀分析等,發(fā)現(xiàn)選取的六種魚類重要病原菌遲鈍愛德華氏菌、鯰魚遲鈍愛德華氏菌、嗜水氣單孢菌、鰻弧菌、溶藻弧菌和哈維氏弧菌中GAPDH蛋白均有向胞外分泌,同時細胞表面也有分布。

而以斑馬魚為實驗對象的GAPDH重組蛋白相對免疫保護率分析表明,來源于不同病原菌的重組蛋白均具有明顯的免疫保護作用,且相互間有一定的交叉免疫保護。最后分析了遲鈍愛德華氏菌EIB202的GAPDH過表達菌株對EPC細胞的侵染能力,結(jié)果發(fā)現(xiàn)GAPDH與病原菌的黏附有一定的相關(guān)性。上述研究結(jié)果的取得為未來利用GAPDH蛋白作為廣譜型保護性抗原蛋白,開發(fā)針對養(yǎng)殖水體多病原的亞單位疫苗提供了優(yōu)選靶標,而遲鈍愛德華氏菌中GAPDH蛋白功能的初步分析,則為后續(xù)其在魚類致病機制中的功能研究奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻

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[5]李小勇.海洋魚類細菌性病原微生物GAPDH蛋白的定位和功能初步研究[D].華東理工大學,2011.