背景[1-3]
2-二醇脫氫酶（膽汁酸結(jié)合蛋白)抗體是可以特異性結(jié)合2-二醇脫氫酶的一類(lèi)多克隆抗體免疫球蛋白。膽汁酸結(jié)合蛋白是參與膽汁酸重吸收的一種胞質(zhì)蛋白,在膽汁酸的肝腸循環(huán)中發(fā)揮重要的作用。
回腸膽汁酸參與膽汁酸的重吸收,使肝腸循環(huán)中膽汁池增加.膽汁酸為膽固醇代謝的產(chǎn)物,膽固醇為血脂的主要組成部分,而高脂血癥是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的重要因素。2-二醇脫氫酶抗體主要作為一抗用于ELISA，WB，IP等實(shí)驗(yàn)，ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
應(yīng)用[4][5]
用于非小細(xì)胞肺癌血清分泌蛋白標(biāo)志物篩選研究
非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)是臨床上最為常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，尋找有效的肺癌診斷標(biāo)志物一直是國(guó)內(nèi)外研究的重要課題。癌細(xì)胞在發(fā)生、生長(zhǎng)中可以分泌某些蛋白質(zhì)進(jìn)入血液，理論上講，血清中肺癌細(xì)胞分泌蛋白可能伴隨肺癌的發(fā)生而出現(xiàn)；且其血清濃度可能與肺癌細(xì)胞的異常增殖和／或其在癌細(xì)胞中的異常表達(dá)量密切相關(guān)。因此，肺癌細(xì)胞分泌蛋白是潛在的肺癌血清標(biāo)志物，且對(duì)肺癌的早期篩選可能具有重要意義。
分泌蛋白二氫二醇脫氫酶(DDH)的Western blot驗(yàn)證以往的研究發(fā)現(xiàn)二氫二醇脫氫酶(DDH)是胞漿蛋白，且在肺癌組中有較高的表達(dá)，因此本研究選擇DDH做進(jìn)一步檢測(cè)。A549細(xì)胞培養(yǎng)液上清蛋白及對(duì)照蛋白樣品按分子克隆試驗(yàn)指南的方法進(jìn)行：每孔上樣量為50μg，進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳分離及轉(zhuǎn)膜，蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF上，封閉，一抗(抗DDH抗體)孵育，洗滌，二抗溫育，PBS洗滌，最后用ECL試劑發(fā)光及顯影。對(duì)肺癌細(xì)胞分泌蛋白進(jìn)行了研究，鑒定出A549細(xì)胞的分泌蛋白包括：α肌動(dòng)蛋白、γ肌動(dòng)蛋白，α烯醇酶(EN01)，錳—超氧化物歧化酶(MnSOD)，谷胱苷肽S轉(zhuǎn)移酶P(GSTP1-1)，二氫二醇脫氫酶(DDH)，磷酸甘油酸變位酶(PGAM1)、葡萄糖依賴(lài)性胰島素釋放肽受體(GIPR)，肽基脯氨基順?lè)串悩?gòu)酶(PPIA)，磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白(PEBP)，蛋白基因產(chǎn)物9.5(PGP9.5)，Peroxiredoxin 1(PDX1)，Galectin-1等。
參考文獻(xiàn)
[1]Prevalent Overexpression of Prolyl Isomerase Pin1 in Human Cancers[J].Lere Bao,Amy Kimzey,Guido Sauter,Janusz M.Sowadski,Kun Ping Lu,Da-Gong Wang.The American Journal of Pathology.2004(5)
[2]Profiling of the secreted proteins during 3T3-L1 adipocyte differentiation leads to the identification of novel adipokines[J].P.Wang,E.Mariman,J.Keijer,F.Bouwman,J.-P.Noben,J.Robben,J.Renes.Cellular and Molecular Life Sciences.2004(18)
[3]Prolyl isomerase Pin1 as a molecular target for cancer diagnostics and therapeutics[J].Kun Ping Lu.Cancer Cell.2003(3)
[4]A proteome study of secreted prostatic factors affecting osteoblastic activity:identification and characterisation of cyclophilin A[J].H Andersen,O.N Jensen,E.F Eriksen.European Journal of Cancer.2003(7)
[5]黃凌瑾.非小細(xì)胞肺癌血清分泌蛋白標(biāo)志物篩選研究[D].中南大學(xué),2007.