231細胞概述^[1]

231細胞來自患有轉(zhuǎn)移乳腺腺癌的51歲女病人的胸水。 在裸鼠和ALS處理的BALB/c小鼠中，它能形成低分化腺癌（III級）。 細胞表達WNT7B癌基因。

培養(yǎng)條件^[1] 

37℃，100% 空氣，無菌恒溫培養(yǎng)。231 細胞增殖能力取決于培養(yǎng)技術(shù)、培養(yǎng)條件等綜合因素。請按照正確的培養(yǎng)方法來復蘇、 傳代、凍存，以此保證細胞具備良好的增殖能力，方便后繼研究順利進行。

細胞傳代^[1] 

1. 當細胞融合度達到 90%以上時，給細胞傳代；

2. 37°C 水浴預熱培養(yǎng)基；

3. 在超凈臺中，棄培養(yǎng)基，加入 2-5mlPBS 清洗細胞后，再加入 1ml 胰酶消化細胞；

4. 顯微鏡下觀察到細胞變圓，有細胞開始脫離瓶壁時，加入 5ml 培養(yǎng)基終止消化；

5. 用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細胞，并輕輕吹打?qū)⒓毎瞪ⅲ?/p>

6. 將細胞移入離心管中，1000rpm 離心 5min；

7. 棄上清，加入 5ml 的培養(yǎng)基（含 10% FBS）重懸細胞后轉(zhuǎn)入沒有透氣孔的 T25 瓶中（確保細胞貼壁后融合度在 25-50%之 間），細胞密度在 1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25 瓶）， 混勻細胞懸液，確保細胞均勻分布； 8. 將培養(yǎng)瓶瓶蓋擰緊后置于 37°C 的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞凍存方法^[1] 

1. 37°C 水浴預熱培養(yǎng)基；

2. 消化細胞后給細胞計數(shù)：

1>. 洗凈晾干血小板計數(shù)板和蓋玻片，將蓋玻片完全覆蓋計數(shù)區(qū)；

2>. 充分混勻細胞，取少量(0.1-0.5ml)細胞懸液與等體積的染色液臺盼藍混合，移液器吹吸混合均勻，用移液器取 20ul 混合液從蓋玻片兩端(與中間凹槽平行的兩端)分別打入細胞，以細胞懸液剛好浸濕蓋玻片為佳；

3>.顯微鏡下，數(shù)四個計數(shù)區(qū)的總細胞數(shù)，無活性細胞染成藍色，活細胞不被染色；

4>.細胞密度=細胞總數(shù)/4×10000×2； 這里 10000 是不變的，因為計數(shù)的細胞是在體積為 1mm×1mm×0.1mm 即 10-4cm3 計數(shù)池內(nèi)，1cm3=1ml，將四個計數(shù)區(qū) 的細胞數(shù)除以 4 取平均數(shù)，乘 2 是補償加等體積臺盼藍形成的稀釋。

5>.細胞活性=活細胞數(shù)/細胞總數(shù)×100%。

注:細胞密度高時，可調(diào)整細胞懸液和臺盼藍的比例，計數(shù)時乘以相應的稀釋倍數(shù)即可。

3. 當細胞密度達到傳代密度且細胞活性在 90%以上時，可以凍存細胞。

4. 在超凈臺中將要凍存的細胞移入離心管，1000rpm 離心 5min。

5. 棄上清，用 70%培養(yǎng)液+20% FBS+10%DMSO 的混合液重懸細胞，并調(diào)整細胞密度為 1-3×106/ml。

主要參考文獻

[1] 林宇，岳麗玲，蔣麗艷；巖大戟內(nèi)酯B對人乳腺癌MDA-MB-231細胞增殖的影響?！吨袊鴮嶒灧絼W雜志》