"MuM-2C Cell|人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞

細(xì)胞背景資料：脈絡(luò)膜；黑色素瘤

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

傳代培養(yǎng)及其操作步驟：原代細(xì)胞培養(yǎng)成功以后，需要進(jìn)行分離培養(yǎng)，否則細(xì)胞會(huì)因生存空間不足或密度過大，營養(yǎng)障礙，影響細(xì)胞生長。細(xì)胞由原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細(xì)胞允許培養(yǎng)的細(xì)胞擴(kuò)增(形成細(xì)胞株)，可以進(jìn)行細(xì)胞克隆，易于保存，但可能喪失一些殊的細(xì)胞和分化征。傳代細(xì)胞形成細(xì)胞株的Zui大利處在于提供了大量持久的實(shí)驗(yàn)材料，便于實(shí)驗(yàn)?！静僮鞑襟E】１)吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液；２)向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜；３)置３７℃孵箱或室溫(２５℃溫度)下進(jìn)行消化，２~５min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大后，應(yīng)立即中止消化；４)吸出消化液，向瓶?jī)?nèi)加入Hanks液少量，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液，終止消化；５)使用彎頭吸管，吸取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液，按順序反復(fù)輕輕吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔，以防用力過猛損傷細(xì)胞；６)用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中，置CO２培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；７)細(xì)胞培養(yǎng)換液時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞生長的狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)要求來確定。一般２～３d后應(yīng)換一次生長液。待細(xì)胞鋪滿器皿底面，即可使用；也可繼續(xù)傳代擴(kuò)大培養(yǎng)或換成維持液?！咀⒁馐马?xiàng)】１)掌握HAO細(xì)胞消化的時(shí)間，消化時(shí)間過短時(shí)，細(xì)胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞脫落、損傷；２)掌握HAO消化濃度，當(dāng)消化液濃度過GAO時(shí)，消化時(shí)間應(yīng)縮短，過低時(shí)細(xì)胞消化時(shí)間相對(duì)延長。

細(xì)胞生長：貼壁

Hs294T細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MDAPCa-2b細(xì)胞、DanG細(xì)胞、J-82細(xì)胞

NCIH1105細(xì)胞類似產(chǎn)品：：ST 486細(xì)胞、LLCMK2細(xì)胞、Detroit 562細(xì)胞

P3.653細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Ect1/E6E7細(xì)胞、HuP-T4細(xì)胞、High Five細(xì)胞

NCIH1155細(xì)胞類似產(chǎn)品：：LS 1034細(xì)胞、Jurkat-E6細(xì)胞、He-La細(xì)胞

CFPAC細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HEK-A細(xì)胞、RPMI8402細(xì)胞、WM115F細(xì)胞

細(xì)胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

MuM-2C Cell|人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞

[細(xì)胞產(chǎn)品包裝]鮮活細(xì)胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細(xì)胞：１ml凍存管(兩支)

細(xì)胞培養(yǎng)過程中，總是會(huì)出現(xiàn)各種意想不到的問題，一不留神就會(huì)全盤皆輸。所謂細(xì)胞虐我千百遍，我待細(xì)胞如初戀。下面是貼壁細(xì)胞的保藏方法，希望對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)初學(xué)操作者有所幫助：1)觀察細(xì)胞狀態(tài)：貼壁細(xì)胞密度達(dá)到85-90%，即可以細(xì)胞凍存形式進(jìn)行保藏，拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)；2)細(xì)胞清洗：培養(yǎng)皿表面消毒后，轉(zhuǎn)移至生物安全柜中，去除培養(yǎng)皿中培養(yǎng)液，加入12mlPBS，輕輕搖晃培養(yǎng)皿清洗細(xì)胞，隨后吸除PBS清洗液；3)細(xì)胞消化：將2ml胰酶加入培養(yǎng)皿中，完全覆蓋細(xì)胞，置于顯微鏡下觀察（期間禁止搖晃培養(yǎng)皿），當(dāng)細(xì)胞剛開始脫落時(shí)，立即轉(zhuǎn)移至生物安全柜中，除去大部分胰酶，剩余約0.5ml胰酶，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)消化，每30秒肉眼觀察細(xì)胞狀態(tài)，至細(xì)胞成流沙狀完全脫落，轉(zhuǎn)移至生物安全柜中，加入12ml完全培養(yǎng)基，終止消化；4)細(xì)胞離心：將終止消化后的細(xì)胞懸液吹打均勻，吸取至15ml離心管中，1000r/min（110g），離心3min；5)細(xì)胞凍存：離心后去除細(xì)胞上清液，按照凍存細(xì)胞量5*10^5/ml，吸取凍存液重懸細(xì)胞沉淀，吹打均勻后分裝至相應(yīng)的凍存管中，進(jìn)行凍存；6)細(xì)胞保藏：凍存管做HAO標(biāo)記，放至程序降溫盒中，于4℃冰箱放置30min，轉(zhuǎn)移至-80℃超低溫冰箱過夜，將過夜后的凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)移至液氮中保藏。

DH-82細(xì)胞類似產(chǎn)品：：PANC-03-27細(xì)胞、CMT167細(xì)胞、BC-009細(xì)胞

MESSADX5細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MALME 3M細(xì)胞、CHL/IU細(xì)胞、P3-X63.Ag8.653細(xì)胞

H220細(xì)胞類似產(chǎn)品：：H-676細(xì)胞、L cells細(xì)胞、EL 4細(xì)胞

NCI-SNU-216細(xì)胞類似產(chǎn)品：：KPL4細(xì)胞、ANA-1細(xì)胞、H4-II-EC3細(xì)胞

細(xì)胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

細(xì)胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細(xì)胞庫

DH-82細(xì)胞類似產(chǎn)品：：PANC-03-27細(xì)胞、CMT167細(xì)胞、BC-009細(xì)胞

MESSADX5細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MALME 3M細(xì)胞、CHL/IU細(xì)胞、P3-X63.Ag8.653細(xì)胞

H220細(xì)胞類似產(chǎn)品：：H-676細(xì)胞、L cells細(xì)胞、EL 4細(xì)胞

NCI-SNU-216細(xì)胞類似產(chǎn)品：：KPL4細(xì)胞、ANA-1細(xì)胞、H4-II-EC3細(xì)胞

細(xì)胞生長特性：貼壁

細(xì)胞系永生化原理介紹：多數(shù)正常細(xì)胞的壽命是有限的，能傳20-100代，但有些細(xì)胞，尤其是來自嚙齒類或來自多數(shù)腫瘤的細(xì)胞，可以產(chǎn)生具有無限壽命的連續(xù)細(xì)胞系。嚙齒類動(dòng)物細(xì)胞在分離時(shí)核型是正常的，在傳到12代左右以后可能出現(xiàn)危相，多數(shù)細(xì)胞在這個(gè)階段死亡了，但少數(shù)細(xì)胞存活下來，并擁有了更GAO的生長率，成為連續(xù)細(xì)胞系。目前認(rèn)為永生化是一個(gè)多步驟的過程，包括一系列細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)基因(如Rb和p53)失活。目前主要從兩個(gè)方向進(jìn)行操作，病毒基因致永生化和端粒酶誘導(dǎo)的永生化，其原理如下：SV40 LT基因常用于誘導(dǎo)永生化。這個(gè)基因的產(chǎn)物-T抗原，可與Rb和p53結(jié)合。這樣不僅使細(xì)胞增殖的壽命得以延長，同時(shí)也限制了如p53這樣基因的DNA監(jiān)控活性，從而使基因組的不穩(wěn)定性增加，也增加了向永生化發(fā)展的進(jìn)一步突變的機(jī)會(huì)(如上調(diào)端粒酶或下調(diào)端粒酶抑制物的活性)。用含可調(diào)節(jié)啟動(dòng)子的端粒酶基因進(jìn)行轉(zhuǎn)染，足以形成永生化細(xì)胞。這些基因中已被廣泛應(yīng)用的有：EBV用于淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞；SV40 LT用于黏附細(xì)胞，如成纖維細(xì)胞(Mayne et al., 1996)、 角質(zhì)形成細(xì)胞(Steinberg,1996) 和內(nèi)皮細(xì)胞(Punchard et al.,1996)等;而hTERT則用于間充質(zhì)干細(xì)胞和其他一些細(xì)胞。

SN12C細(xì)胞類似產(chǎn)品：：H727細(xì)胞、D283-MED細(xì)胞、TJ905細(xì)胞

KP-2細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NBL-S細(xì)胞、Colo-206F細(xì)胞、NCI-SNU-16細(xì)胞

H-716細(xì)胞類似產(chǎn)品：：CHL-IU細(xì)胞、KYSE140細(xì)胞、MGH-U3細(xì)胞

SBC-3細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HCC4006細(xì)胞、NCIH716細(xì)胞、RM-1細(xì)胞

Detroit-562細(xì)胞類似產(chǎn)品：：T98細(xì)胞、H-35 Reuber細(xì)胞、QGP-1細(xì)胞

SNU668細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Malme-3M細(xì)胞、H-446細(xì)胞、DU 4475細(xì)胞

KYSE-180細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SUM190細(xì)胞、PC-2 [Human pancreatic carcinoma]細(xì)胞、SKNBE(1)細(xì)胞

AD-293細(xì)胞類似產(chǎn)品：：C4-2 Bone metastatic細(xì)胞、KYSE 150 KYSE150 Kyse150 KY150

細(xì)胞、Hs 888Lu細(xì)胞

WISH細(xì)胞類似產(chǎn)品：：OLN 93細(xì)胞、OVCA433細(xì)胞、SW-1116細(xì)胞

Colo16細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HBMEC細(xì)胞、NCIH520細(xì)胞、Wills Eye Research Institute-Retinoblastoma-1細(xì)胞

MuM-2C Cell|人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞

MDCK細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SK-BR-3細(xì)胞、PNEC30細(xì)胞、293/EBNA-1細(xì)胞

CT26.WT細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NCIH1341細(xì)胞、SCC-25細(xì)胞、SN-12C細(xì)胞

NHA細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MPP-89細(xì)胞、CNE細(xì)胞、NIE 115細(xì)胞

SK-MEL2細(xì)胞類似產(chǎn)品：：COLO824細(xì)胞、NCIH2286細(xì)胞、NBL-2細(xì)胞

RT-4細(xì)胞類似產(chǎn)品：：CCRFCEM細(xì)胞、HPDE6c7細(xì)胞、ASH-3細(xì)胞

OCI Ly1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NCIH1437細(xì)胞、P3X63 Ag8.653細(xì)胞、SUDHL-2細(xì)胞

RLE-6TN細(xì)胞類似產(chǎn)品：：C3H10T1/2CL8細(xì)胞、U-251MG細(xì)胞、RWPE-1細(xì)胞

BetaTC6細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NIH-OVCAR-3細(xì)胞、Hs895.T細(xì)胞、A-172細(xì)胞

KASUMI1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：9L細(xì)胞、Tca-8113細(xì)胞、NCI-H295R細(xì)胞

H322細(xì)胞類似產(chǎn)品：：P3-x63-Ag8 653細(xì)胞、Jiyoye細(xì)胞、293F細(xì)胞

Hs 695T細(xì)胞類似產(chǎn)品：：P3/NS1/1-Ag4-1細(xì)胞、L-6細(xì)胞、Hos TE-85細(xì)胞

RA 1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NCTC 1469細(xì)胞、A549 ATCC細(xì)胞、A-704細(xì)胞

H3255_DA細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HCS2/8細(xì)胞、KPL-4細(xì)胞、OCI Ly3細(xì)胞

Capan1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SK-RC-20細(xì)胞、UWB1-289細(xì)胞、HRMC細(xì)胞

H-711細(xì)胞類似產(chǎn)品：：GM03570細(xì)胞、SNK1細(xì)胞、NIT-1細(xì)胞

OVCAR420細(xì)胞類似產(chǎn)品：：SiHa細(xì)胞、MDA MB 134VI細(xì)胞、SF767細(xì)胞

Y3細(xì)胞類似產(chǎn)品：：KLN205細(xì)胞、MuM-2B細(xì)胞、hRMECs細(xì)胞

Fetal Human Colon細(xì)胞類似產(chǎn)品：：GM04154細(xì)胞、PBMC細(xì)胞、SR786細(xì)胞

H2030細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Molm14細(xì)胞、CALU1細(xì)胞、L 1210細(xì)胞

MHH-CALL-2細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HIEC細(xì)胞、KYSE 270細(xì)胞、OCI/AML-3細(xì)胞

KP-N-NS細(xì)胞類似產(chǎn)品：：CV 1細(xì)胞、NTERA-2cl.D1細(xì)胞、OVCAR420細(xì)胞

H-719細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Caki2細(xì)胞、H1155細(xì)胞、HuT 102細(xì)胞

UWB1-289細(xì)胞類似產(chǎn)品：：A2780/CP細(xì)胞、HHFK細(xì)胞、DBTRG-05MG細(xì)胞

X63-Ag8.653細(xì)胞類似產(chǎn)品：：LU451細(xì)胞、H-196細(xì)胞、SHIN3細(xì)胞

OVCAR 4細(xì)胞類似產(chǎn)品：：TSCC1細(xì)胞、HIEC細(xì)胞、NPA-87細(xì)胞

MGHU3細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MOLT.4細(xì)胞、WM-115細(xì)胞、NCIH1963細(xì)胞

H-508細(xì)胞類似產(chǎn)品：：LLCPK1細(xì)胞、NCIH727細(xì)胞、University of Arizona Cell Culture-812細(xì)胞

HEK 293細(xì)胞類似產(chǎn)品：：WM266細(xì)胞、PaTu8988s細(xì)胞、LN382細(xì)胞

RKOAS451細(xì)胞類似產(chǎn)品：：T2(174 x CEM.T2)細(xì)胞、H-2141細(xì)胞、H-820細(xì)胞

MuM-2C Cell|人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞

LLC-MK2細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Primary Liver Carcinoma/Poliomyelitis Research Foundation/5細(xì)胞、PC3細(xì)胞、L-M (TK-)細(xì)胞

PC-3M-IE8細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MDA-MB-231-GFP細(xì)胞、M059J細(xì)胞、CCK-81細(xì)胞

3 LL細(xì)胞類似產(chǎn)品：：UM-UC14細(xì)胞、NCI-H1954細(xì)胞、GM03671細(xì)胞

Y3-Ag123細(xì)胞類似產(chǎn)品：：C4-1細(xì)胞、SK RC 20細(xì)胞、Hep-G2/C3A細(xì)胞

NCI-H2030細(xì)胞類似產(chǎn)品：：TK+/- (clone 3.7.2C)細(xì)胞、H-2591細(xì)胞、BIU-87/Adr細(xì)胞

CCC-ESF-1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：H1781細(xì)胞、Namalwa細(xì)胞、MB231細(xì)胞

ML-2細(xì)胞類似產(chǎn)品：：CAMA細(xì)胞、H2452細(xì)胞、NCIH508細(xì)胞

GEO細(xì)胞類似產(chǎn)品：：NCI-H1373細(xì)胞、BSC-40細(xì)胞、OCI-LY-7細(xì)胞

MD Anderson-Metastatic Breast-231細(xì)胞類似產(chǎn)品：：95D細(xì)胞、Hs 940.T細(xì)胞、UACC812細(xì)胞

38C13細(xì)胞類似產(chǎn)品：：YH細(xì)胞、P31-FUJ細(xì)胞、Tn5 B1-4細(xì)胞

ECC12細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HEK-EBNA細(xì)胞、U-118 MG細(xì)胞、Tadarida brasiliensis 1 lung細(xì)胞

OSC19細(xì)胞類似產(chǎn)品：：BL-6細(xì)胞、SEG-1細(xì)胞、SU86_86細(xì)胞

COLO 320HSR細(xì)胞類似產(chǎn)品：：A 72細(xì)胞、OV90細(xì)胞、HHL-5細(xì)胞

Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-4細(xì)胞類似產(chǎn)品：：MDA-MB361細(xì)胞、SW-837細(xì)胞、Cloudman M3細(xì)胞

EFM19細(xì)胞類似產(chǎn)品：：HCC78細(xì)胞、MC3T3細(xì)胞、SKRC-52細(xì)胞

G-292, clone A141B1細(xì)胞類似產(chǎn)品：：Hs 766.T細(xì)胞、SCC-1395細(xì)胞、MT4細(xì)胞

BL1339細(xì)胞類似產(chǎn)品：：L363細(xì)胞、OVISE細(xì)胞、H-358細(xì)胞

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