"KGN Cell|人卵巢顆粒細胞

細胞背景資料：該細胞株是顆粒細胞瘤。細胞在加入人體絨膜促性腺激素后可能產生孕酮。細胞生長緩慢。

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

體內細胞培養(yǎng)及其操作步驟：【瘤細胞懸液接種】１)無菌選取生長良HAO(有光澤，淡紅色)瘤組織或對數生長期培養(yǎng)瘤細胞；２)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經８０～１００目篩網過濾成細胞懸液；３)培養(yǎng)細胞應用PBS洗兩遍；４)計數并調整細胞濃度至１０７～１０８／ml；５)常規(guī)消毒后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液(０.１ml／部位，＞１０６細胞)。初次接種成功率低，細胞數盡可能多一些；６)次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，Zui后固定為一個相對穩(wěn)定的時間?！靖顾龅慕⑴c腹水瘤的接種】將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細胞，將這種腹水反復傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時，腹水常呈血性(含大量紅細胞)，反復傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下。１)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細胞離心和洗滌，進行細胞計數；２)消毒動物，左下腹穿刺接種１０６腹水瘤細胞；３)接種腹水瘤細胞后約７~１２d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用９號針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽３~５ml；４)抽取的腹水經３０００rpm離心１５min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩?/p>

細胞生長：貼壁

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細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

KGN Cell|人卵巢顆粒細胞

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

在細胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細胞生長角度來說，針對細胞培養(yǎng)過程中生長不HAO、甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養(yǎng)細胞生長不HAO》可能原因：細胞本身的狀態(tài)》1)細胞傳代次數多，細胞老化；2)細胞的接種量：接種量過低，細胞生長緩慢；3)細胞傳代時間過晚：細胞中毒，影響傳代后的細胞生長；4)胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細胞死亡；時間過短，細胞未完全分離而成團，細胞死亡；5)細胞的凍存與復蘇：慢凍速融。污染：1)支原體污染；2)霉菌污染；培養(yǎng)基或血清：1)更換血清或培養(yǎng)基之前未進行驗證；2)選擇的培養(yǎng)基是否合適；3)培養(yǎng)基配制是否準確無誤；培養(yǎng)環(huán)境：1)CO2供應是否正常；2)培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確；解決方法：根據以上四個方面的可能原因，做出針對性的解決方案》1)注意細胞的本身狀態(tài)：如傳代次數、接種量等；2)避免產生污染（用正規(guī)、合法、可溯源的血清）；3)要用合適的血清或培養(yǎng)基，ZuiHAO經過驗證；4)注意實驗室的環(huán)境；二、培養(yǎng)細胞死亡》可能原因：1)培養(yǎng)箱內無CO2；2)培養(yǎng)箱內溫度波動太大；3)細胞凍存或復蘇過程中損傷；4)培養(yǎng)液滲透壓不正確；5)培養(yǎng)液中有毒代謝產物堆積；解決方法：1)檢測培養(yǎng)箱內CO2；2)檢查培養(yǎng)箱內溫度；3)取新的保存細胞種；4)檢測培養(yǎng)液滲透壓；5)換入新鮮培養(yǎng)液。

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細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

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細胞生長特性：貼壁

細胞系永生化原理介紹：多數正常細胞的壽命是有限的，能傳20-100代，但有些細胞，尤其是來自嚙齒類或來自多數腫瘤的細胞，可以產生具有無限壽命的連續(xù)細胞系。嚙齒類動物細胞在分離時核型是正常的，在傳到12代左右以后可能出現(xiàn)危相，多數細胞在這個階段死亡了，但少數細胞存活下來，并擁有了更GAO的生長率，成為連續(xù)細胞系。目前認為永生化是一個多步驟的過程，包括一系列細胞周期的調節(jié)基因(如Rb和p53)失活。目前主要從兩個方向進行操作，病毒基因致永生化和端粒酶誘導的永生化，其原理如下：SV40 LT基因常用于誘導永生化。這個基因的產物-T抗原，可與Rb和p53結合。這樣不僅使細胞增殖的壽命得以延長，同時也限制了如p53這樣基因的DNA監(jiān)控活性，從而使基因組的不穩(wěn)定性增加，也增加了向永生化發(fā)展的進一步突變的機會(如上調端粒酶或下調端粒酶抑制物的活性)。用含可調節(jié)啟動子的端粒酶基因進行轉染，足以形成永生化細胞。這些基因中已被廣泛應用的有：EBV用于淋巴母細胞樣細胞；SV40 LT用于黏附細胞，如成纖維細胞(Mayne et al., 1996)、 角質形成細胞(Steinberg,1996) 和內皮細胞(Punchard et al.,1996)等;而hTERT則用于間充質干細胞和其他一些細胞。

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