熒光染料的優(yōu)點(diǎn):
使用簡便;
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合;
價格便宜;
熒光染料的缺點(diǎn):
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。
總的來說,SYBR Green I方法是一種最基礎(chǔ)也最常用的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。
產(chǎn)品名稱 |
斑點(diǎn)病密螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 |
Treponema carateum |
貨號 |
XGR97309 |
熒光化學(xué)物質(zhì):
實(shí)時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料?,F(xiàn)將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時,報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的首選技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo):是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補(bǔ)配對,導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近,不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括絕對定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的絕對定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
人乙酰膽堿酯酶(AChE)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 別稱:ACEE, ARACHE, N-ACHE, YT, acetylhydrolase Human AChE(Acetylcholinesterase) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組AChE濃度
rawl-kotrif RAW-Lucia? ISG-KO-TRIF Cells 3-7 x 10e6 cells
rms-kdmyd Ramos-Blue? KD-MyD Cells 3-7 x 10e6 cells
293d-null 293T-Dual? Null Cells 3-7 x 10e6 cells
hkb-null1 HEK-Blue? Null1 cells 3-7 x 10e6 cells
hkb-null1k HEK-Blue? Null1-k cells 3-7 x 10e6 cells
植物組培盒 方形8-Anilino-naphthalenesulfonic acid8268-苯胺-萘磺酸
棕色玻璃瓶p-Anisic acid09對茴香酸
黃曲霉毒素M1快速檢測卡(膠體金法)3,3',4,4'-Benzophenone tetracarboxylic dianhydride242183,3',4,4'-二苯甲酮四甲酸二酐
氯霉素快速檢測卡(膠體金法)o-Anisic acid5795鄰甲酸
三聚胺快速檢測卡(膠體金法)1,2-Benzisothiazolin-one263431,2-苯并異噻唑-酮
20-Hydroxyecdysone 中文名:20-羥基蛻皮甾酮 分子式:C27H44O7 固(ALD) 96T/48T
2-[2-(2,2,2-Trifluoroethoxy)phenoxy]ethyl methanesulfonate 中文名: 分子式:C11H13F3O5S 基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9) 96T/48T
斑點(diǎn)病密螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒2-[(Acetylthio)methyl]-phenylpropionic acid 中文名: 分子式:C12H14O3S 基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1) 96T/48T
2-[(6-Chloro-3,4-dihydro-3-methyl-2,4-dioxo-1(2H)-pyrimidinyl)methyl]benzonitrile 中文名: 分子式:C13H10ClN3O2 緊張素Ⅱ一型受體抗原 英文名稱: Angiotensin 2 Receptor 1 Aigen 英文縮寫: AT1R 規(guī)格: 48T/96T
2,6-Dimethoxy-1-acetonylquinol 中文名: 分子式:C11H14O5 抗緊張素‖受體︱型自身抗體 英文名稱: Angiotensin 2 Receptor 1 Aoaibodies 英文縮寫: AT1R-AA 規(guī)格: 48T/96T
產(chǎn)品及特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
關(guān)鍵字: 斑點(diǎn)病密螺旋體探;探針法;熒光定量PCR試劑盒;Treponema carateum;XGR97309;
上海西格生物科技有限公司( Shanghai Sig Biotechnology Co., Ltd)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細(xì)胞株、原代細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
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