PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱:斑點病密螺旋體PCR試劑盒
英文名稱:Treponema carateumPCR
編號: FSP2309
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
數(shù)據(jù)采集:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結合DNA 時,吸收光譜在 471nm,結合 DNA 時的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
Goat Anti-Chicken IgG/Cy5.5Cy5.5標記的羊抗雞IgG特價促銷anti- SUCLG1 antibody氰乙酸2-氯乙基乙烯基醚
Goat Anti-Chicken IgG/Cy7Cy7標記的羊抗雞IgG特價促銷anti- SUCLG2 antibody氰乙酸烯丙基縮水甘油醚
Goat Anti-Chicken IgG/PEPE標記的羊抗雞IgG特價促銷anti- SUDS3 antibody天然辣椒堿三乙二醇單乙醚
Goat Anti-Chicken IgG/PE-Cy3PE-Cy3標記的羊抗雞IgG特價促銷anti- SUFU antibody順-2-丁烯-1,4-二醇雙(2-二苯基磷苯基)醚
Goat Anti-Chicken IgG/PE-CY5PE-CY5標記的羊抗雞IgG特價促銷anti- SUGT1 antibody順-2-丁烯-1,4-二醇5-氨基-3-甲基異惡唑
Goat Anti-Chicken IgG/APCAPC標記的羊抗雞IgG特價促銷anti- SULF2 antibody細胞色素C(馬心)3-氨基-5-甲基異惡唑
Goat Anti-Chicken IgG/Alexa Fluor 350Alexa Fluor 350標記的羊抗雞IgG特價促銷anti- SULT1A1 antibody細胞色素C(牛心)苯基炔丙基醚
Goat Anti-Chicken IgG/Alexa Fluor 488Alexa Fluor 488標記的羊抗雞IgG特價促銷anti- SULT1A1 antibody2-氯-1-(二甲氨基)丙烷鹽酸鹽4-羥基-3-叔丁基-苯甲醚
斑點病密螺旋體PCR試劑盒rat aldosterone,ALD ELISA試劑盒PDGF-BB 血小板源性生長因子-BB抗體二甲基三硫 磺達肝癸鈉
Rat alkaline phosphatase,ALP ELISA試劑盒PDGFRA 血小板源性生長因子受體A抗體(PDGFRα)2-巰基-5-氯苯并噻唑 7-溴-1,2,3,4-四氫喹啉鹽酸
Rat Alpha-fetoprotein,AFP ELISA試劑盒Phospho-PDGFRA(Tyr1018) 磷酸化血小板源性生長因子受體-α抗體苯并噻唑-2-甲醛 7-溴-2,4(1H,3H)-喹唑啉二酮
Rat alpha-granular membrane protein,GMP-140 ELISA試劑盒Phospho-PDGFRA(Tyr754) 磷酸化血小板源性生長因子受體-α抗體N-甲基吲哚 (E)-3-(叔丁基二甲基硅氧基)丙烯-1-基-硼酸頻哪醇酯
Rat alpha-L-fucosidase,AFU ELISA試劑盒Phospho-PDGFRA(Tyr849)/PDGFRB(Tyr857) 磷酸化血小板源性生長因子受體α/β抗體5-甲基-6,7-二氫-5H-環(huán)戊并吡嗪 N-CBZ-甘氨酸乙酯
Rat Alternative macrophage activation-associated CC chemokine 1,AMAC-1 ELISA試劑盒Phospho-PDGFRA(Tyr988) 磷酸化血小板源性生長因子受體α4-甲氧基苯甲醇甲酸酯 3-Boc-6-氧雜-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己烷
Rat Amylin ELISA試劑盒Phospho-PDGFRA(Tyr572) 磷酸化血小板源性生長因子受體α2,2,3-三溴丙醛 2,3,6-三氟苯基乙酸
Rat amyloid beta peptide 1-40,Aβ1-40 ELISA試劑盒Phospho-PDGFRA(Tyr762) 磷酸化血小板源性生長因子受體α1,3-雙(2,4-二氨基苯氧基)丙烷 伊班磷酸
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關鍵字: 斑點病密螺旋體;PCR試劑盒;50T;FSP2309;
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學、分子生物學和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細胞株、原代細胞、細胞培養(yǎng)基、標準溶液產(chǎn)品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
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