PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)
產(chǎn)品名稱 |
英文名稱 |
貨號(hào) |
乙型肝炎病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 |
Hepatitis B Virus(HBV)cccDNA |
XGR96823 |
【結(jié)果分析條件設(shè)定】
u 基線(Baseline)設(shè)定:應(yīng)選擇該次實(shí)驗(yàn)指數(shù)擴(kuò)增前所有樣本熒光信號(hào)比較穩(wěn)定的一段區(qū)域(所有樣本熒光信號(hào)無(wú)較大波動(dòng)),起始點(diǎn)(Start)應(yīng)避開熒光采集起始階段的信號(hào)波動(dòng),終止點(diǎn)(End)應(yīng)比最早出現(xiàn)指數(shù)擴(kuò)增的樣本Ct值減少1~3個(gè)循環(huán),建議基線設(shè)為6~15。
u 閾值(Threshold)設(shè)定:將閾值線設(shè)定在剛好超過(guò)正常陰性質(zhì)控品擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)。
【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】
1. 陰性質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性,無(wú)指數(shù)擴(kuò)增期,Ct=40或無(wú)Ct;
2. 陽(yáng)性質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性,有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,Ct值應(yīng)小于等于35;
3. 以上要求需在一次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)滿足,否則該次實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。
【結(jié)果判斷】
1. 陽(yáng)性:有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,且Ct<38;
2.可疑:有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,且38≤Ct<40,此時(shí)樣本為可疑樣本;對(duì)于可疑樣本建議復(fù)核一次,若復(fù)核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴(kuò)增期,則判定為陽(yáng)性,否則判定為陰性;
3. 陰性:無(wú)指數(shù)擴(kuò)增期,Ct=40或無(wú)Ct值均判定為陰性樣本。
【對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1. 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染、試劑污染、樣品交叉污染會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果;
2. 試劑運(yùn)輸、保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,可能會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
具有下列特點(diǎn):
1. 一站式,足夠 50 次酶切-連接反應(yīng)、50 次預(yù)擴(kuò)反應(yīng)和 1600 次 AFLP PCR(PCR 按 30 uL 體系計(jì)算),但不包括 DNA 純化和帶型分析試劑(如 PAGE 電泳試劑和 銀染試劑)。
2. 本系列產(chǎn)品提供 EcoRI-MseI 組合,適用于 GC 含量在 50%以上的基因組。對(duì) GC 含量在 50%以下的基因組,需從本公司采購(gòu) AFLP(EcoRI-TaqI)組合。
3. 各種參數(shù)都經(jīng)過(guò)優(yōu)化,一次 PCR 所得 AFLP 片段數(shù)一般在 10-100 之間,可重復(fù) 性好,誤差小于 0.6%。4. 本產(chǎn)品適用于基因組在 500 Mb-6000 Mb 的材料(如動(dòng)物和植物),對(duì)于基因組 在 50-500 Mb 的材料(如細(xì)菌和真菌)或 50Mb 以下的材料(如質(zhì)粒,cosmid, BAC,YAC 和 PAC 等),需要分別另購(gòu)專門的+1 型預(yù)擴(kuò)引物混合液和+3 型 EcoRI 引物(8 種)AFLP 引物對(duì)。
實(shí)驗(yàn)外包:
1.基因組學(xué):基因芯片、SNP檢測(cè)、DNA甲基化檢測(cè)、生物信息學(xué)分析
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測(cè):DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測(cè):Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測(cè):HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選
7.代謝組學(xué):GC-MS、LC-MS、NMR
8.細(xì)胞及動(dòng)物模型:原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動(dòng)物模型構(gòu)建
大車前苷 104777-68-6 HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢 Rat aldosterone (ALD) ELISA Kit 大鼠固酮(ALD)ELISA試劑盒 AFPA LYVE1 Others Mouse 小鼠 LYVE1 / LYVE-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 聚乙二醇200shēng huà shì jì容量:保存:-20℃1克
丙酸;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 1979-9-4 1g 訂購(gòu)|咨詢 CLIAKitforMouseLactateDehydrogenase,LDHELISAKit小鼠乳酸脫氫酶規(guī)格:48T/96T 酚紅葡萄糖肉湯 250g 用于蠟樣芽孢桿菌葡萄糖分解試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn)) TJ905細(xì)胞,人膠質(zhì)瘤細(xì)胞 惡臭假單胞菌 人肺間充質(zhì)干細(xì)胞總RNAHPMSC NA 三苯基氧化膦/三苯基氧膦/Triphenylphosphine oxide AR,98%, 25克 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
丙酸;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 1979-9-4 1g 訂購(gòu)|咨詢 CLIAKitforMouseLactateDehydrogenase,LDHELISAKit小鼠乳酸脫氫酶規(guī)格:48T/96T 酚紅葡萄糖肉湯 250g 用于蠟樣芽孢桿菌葡萄糖分解試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn)) TJ905細(xì)胞,人膠乙型肝炎病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒質(zhì)瘤細(xì)胞 惡臭假單胞菌 人肺間充質(zhì)干細(xì)胞總RNAHPMSC NA 三苯基氧化膦/三苯基氧膦/Triphenylphosphine oxide AR,98%, 25克 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
137234-62-9 伏立康唑標(biāo)準(zhǔn)品 100mg Porcine growth hormone releasing peptide GHR 豬生長(zhǎng)激素釋放肽ghr 培養(yǎng)基P250g用于梭菌的增菌培養(yǎng)和計(jì)數(shù)。 PTPN12 Others Human 人 PTPN12 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 氧化鐵shēng huà shì jì容量:25克
服務(wù)流程:
乙型肝炎病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。