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本品產(chǎn)僅供科研
產(chǎn)品名稱:乙型肝炎病毒型染料法熒光定量PCR試劑盒Hepatitis B Virus(HBV)
產(chǎn)品規(guī)格:50次/盒
本產(chǎn)品是以染料法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的PCR試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1.即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。
2.引物等組分經(jīng)過優(yōu)化,靈敏度高。
3.提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4.特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會跟其他的DNA/RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5.既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時(shí)線性范圍至少為5個數(shù)量級。
6.本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的染料法熒光定量PCR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研
乙型肝炎病毒型染料法熒光定量PCR試劑盒Hepatitis B Virus(HBV)操作方法一、制備標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,
千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,
只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1.標(biāo)記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。
3.在7號管中加入5 μL 陽性對照(其濃度為1×10E8拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4.換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5.換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6.重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
1.用自選方法純化樣品的DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
2.如果有N個樣品,則需要進(jìn)行N+2個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
如果進(jìn)行定量分析,則標(biāo)記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。
如果做定性分析,則6個標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品只選一個做(可以選4號,其余樣品不變)。以下只介紹定量分析的反應(yīng)設(shè)置。
四、數(shù)據(jù)處理
1.通過溶解曲線分析的結(jié)果排除無效數(shù)據(jù)。有Ct值,但Tm值跟陽性對照Tm不一樣的樣品(包括對照和待測樣品),歸為假陽性,數(shù)據(jù)無效,不予以分析。Tm跟陽性對照Tm一致的,為有效Ct。
2.如果兩種陰性對照的溶解曲線所得Tm值跟陽性對照的Tm值一樣,說明環(huán)境或試劑可能有過去的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染,則此次實(shí)驗(yàn)無效,需要解決污染問題再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
3.如果兩種陰性對照(樣品制備陰性對照和PCR陰性對照)是假陽性,可以繼續(xù)分析其它樣品有效數(shù)據(jù)。
4.對定量檢測,以陽性對照樣品的濃度的log值為橫軸,以有效Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的有效Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再換算出待測樣品的DNA濃度。
5.對定性檢測,則有有效Ct值的為陽性,無有效Ct值的為陰性。
乙型肝炎病毒型染料法熒光定量PCR試劑盒Hepatitis B Virus(HBV)樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限一年。陽性對照需單獨(dú)放置,不要污染其他試劑。
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
4、自備試劑:樣品DNA。
乙型肝炎病毒型染料法熒光定量PCR試劑盒Hepatitis B Virus(HBV)注意事項(xiàng)
1所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行
2試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,混勻并短暫離心;
3 反應(yīng)液應(yīng)避光保存;
4反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
5使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;
6 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;
7 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;
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關(guān)鍵字: 乙型肝炎病毒型染料法熒光定量PCR試劑盒;Hepatitis B Virus(HB;乙型肝炎病毒型染料法熒光定量PCR試劑盒;PCR檢測試劑盒;晶風(fēng)PCR試劑盒;
上海晶風(fēng)生物科技有限公司擁有一個蓬勃朝氣的年輕團(tuán)隊(duì),是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域,提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛小熬эL(fēng)生物”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)享有一定的聲譽(yù),深得新老客戶厚愛。本著“服務(wù)、誠信、進(jìn)取”的精神,堅(jiān)持溝通你我,創(chuàng)新服務(wù),為國內(nèi)外廣大用戶提供產(chǎn)品和服務(wù)。