PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
產(chǎn)品名稱 |
英文名稱 |
貨號 |
馬皰疹病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒 |
Equine Herpesvirus(EHV) |
XGR96723 |
【結(jié)果分析條件設(shè)定】
u 基線(Baseline)設(shè)定:應(yīng)選擇該次實驗指數(shù)擴增前所有樣本熒光信號比較穩(wěn)定的一段區(qū)域(所有樣本熒光信號無較大波動),起始點(Start)應(yīng)避開熒光采集起始階段的信號波動,終止點(End)應(yīng)比最早出現(xiàn)指數(shù)擴增的樣本Ct值減少1~3個循環(huán),建議基線設(shè)為6~15。
u 閾值(Threshold)設(shè)定:將閾值線設(shè)定在剛好超過正常陰性質(zhì)控品擴增曲線的最高點。
【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】
1. 陰性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應(yīng)為陰性,無指數(shù)擴增期,Ct=40或無Ct;
2. 陽性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應(yīng)為陽性,有明顯的指數(shù)擴增期,Ct值應(yīng)小于等于35;
3. 以上要求需在一次實驗中同時滿足,否則該次實驗視為無效。
【結(jié)果判斷】
1. 陽性:有明顯的指數(shù)擴增期,且Ct<38;
2.可疑:有明顯的指數(shù)擴增期,且38≤Ct<40,此時樣本為可疑樣本;對于可疑樣本建議復(fù)核一次,若復(fù)核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴增期,則判定為陽性,否則判定為陰性;
3. 陰性:無指數(shù)擴增期,Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。
【對檢驗結(jié)果的解釋】
1. 實驗室環(huán)境污染、試劑污染、樣品交叉污染會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;
2. 試劑運輸、保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,可能會導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
具有下列特點:
1. 一站式,足夠 50 次酶切-連接反應(yīng)、50 次預(yù)擴反應(yīng)和 1600 次 AFLP PCR(PCR 按 30 uL 體系計算),但不包括 DNA 純化和帶型分析試劑(如 PAGE 電泳試劑和 銀染試劑)。
2. 本系列產(chǎn)品提供 EcoRI-MseI 組合,適用于 GC 含量在 50%以上的基因組。對 GC 含量在 50%以下的基因組,需從本公司采購 AFLP(EcoRI-TaqI)組合。
3. 各種參數(shù)都經(jīng)過優(yōu)化,一次 PCR 所得 AFLP 片段數(shù)一般在 10-100 之間,可重復(fù) 性好,誤差小于 0.6%。4. 本產(chǎn)品適用于基因組在 500 Mb-6000 Mb 的材料(如動物和植物),對于基因組 在 50-500 Mb 的材料(如細菌和真菌)或 50Mb 以下的材料(如質(zhì)粒,cosmid, BAC,YAC 和 PAC 等),需要分別另購專門的+1 型預(yù)擴引物混合液和+3 型 EcoRI 引物(8 種)AFLP 引物對。
實驗外包:
1.基因組學(xué):基因芯片、SNP檢測、DNA甲基化檢測、生物信息學(xué)分析
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片、LncRNA芯片、表達譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測:Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測:HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細胞分選
7.代謝組學(xué):GC-MS、LC-MS、NMR
8.細胞及動物模型:原代細胞、細胞模型、動物模型構(gòu)建
櫟櫻酸 6812-81-3 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 Humancytovillin/ezrin,CVLELISA試劑盒人細胞絨毛蛋白/埃茲蛋白(CVL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T Salmonella-ShigellaAgar HL-60細胞,早幼粒急性白血病細胞系 人T細胞淋巴瘤,Hurt-78細胞 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細胞;PUMC-mips-C2 L--GlucoseL-(-)-無水葡萄糖2×0.25毫升BR,95%
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134678-17-4 拉米夫定系統(tǒng)適應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 10mg CLIAKitforL-Selectin/CD62LELISAKit大鼠L選擇素規(guī)格:48T/96T 葡萄糖酸鹽20支綠膿桿菌用 mEPC, 小鼠內(nèi)皮祖細胞-骨髓 小鼠精母細胞,GC-2spd細胞 Mv.1.Lu(NBL-7)(貂肺上皮細胞) 液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(不含瓊脂)shēng huà shì jì容量:100克
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。