PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱:文氏密螺旋體PCR試劑盒
英文名稱:Treponema vincentiiPCR
編號: FSP2315
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
數(shù)據(jù)采集:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結合DNA 時,吸收光譜在 471nm,結合 DNA 時的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 647Alexa Fluor 647標記的羊抗人IgM特價促銷anti- SYN1-Specific antibody6-氯吡啶-3-硼酸4-碘吡啶
Goat Anti-human IgM/PE-Cy5.5PE-Cy5.5標記的羊抗人IgM特價促銷anti- SYN2 antibody6-氯吡啶-3-硼酸嘧啶
Goat Anti-human IgM/PE-Cy7PE-Cy7標記的羊抗人IgM特價促銷anti- Synaptogyrin 1 antibody硫酸銫2-氨基-5-氯吡啶
Goat Anti-human IgM/Bio生物素標記的羊抗人IgM特價促銷anti- Synaptogyrin-4 antibody硫酸銫2-氨基-4-氯-6-甲基嘧啶
Goat Anti-human IgM/Gold膠體金標記的羊抗人IgM特價促銷anti- Synaptojanin 2 antibody2-氯苯并咪唑2-氨基-5-氯嘧啶
Goat Anti-human IgM/AP堿性磷酸酶(AP)標記的羊抗人IgM特價促銷anti- Synaptophysin antibody2-氯苯并咪唑2-氨基-6-甲基吡啶
Goat Anti-human IgM/HRP辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgM特價促銷anti- Synaptophysin antibody氫氧化鈷2-氨基嘧啶
Mouse Anti-human IgG/HRP辣根過氧化物酶標記的小鼠抗人IgG特價促銷anti- Synaptopodin antibody氫氧化鈷4-(2-氨乙基)吡啶
文氏密螺旋體PCR試劑盒Rat Apolipoprotein H,Apo-H ELISA試劑盒PERK 蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗體4-(二氟甲氧基)苯甲醛 2,2-二氟-3-羥基戊酸乙酯
Rat apoprotein A1,apo-A1 ELISA試劑盒Phospho-PERK(Thr980) 磷酸化蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗體二芐基-N,N-二異丙基亞磷酰胺 2-溴-3,4-二氟苯胺
Rat apoprotein B100,apo-B100 ELISA試劑盒Perilipin A 脂滴包被蛋白Perilipin-A抗體3-溴-4-羥基-5-硝基吡啶 6-甲基-3H-噻吩[2,3-d]嘧啶-4-酮
Rat apoptosis inducing factor,AIF ELISA試劑盒PER1 protein 節(jié)律抑制蛋白PER1抗體反式-3-氯-2-丙烯基羥胺鹽酸鹽 氯磺酚S
Rat Aquaporin 0,AQP-0 ELISA試劑盒PER2/Period circadian protein 2 節(jié)律蛋白2抗體3-硝基-4-羥基喹啉 3,5-二溴-2-氯吡嗪
Rat Aquaporin 1,AQP-1 ELISA試劑盒 PFK2/PFKFB3 6磷酸果糖激酶2抗體5-甲基四唑 5-溴-4-甲基-1H-吲唑
Rat Aquaporin 2,AQP-2 ELISA試劑盒Phospho-PFK2 (Ser467) 磷酸化6磷酸果糖激酶2抗體3-氯-4-異丙氧基苯硼酸 2-氯-3-氟-5-硝基吡啶
Rat Aquaporin 3,AQP-3 ELISA試劑盒PFKL/Fructose 6 Phosphate Kinase 6磷酸果糖激酶抗體4-哌啶基哌啶二鹽酸鹽 噻吩并[3,2-b]吡啶-7-醇
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關鍵字: 文氏密螺旋體;PCR試劑盒;50T;FSP2315;
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學、分子生物學和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細胞株、原代細胞、細胞培養(yǎng)基、標準溶液產(chǎn)品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)先后與天津中醫(yī)學院、復旦大學、上海交通大學醫(yī)學院、上海交通大學、華東師范大學、第二軍醫(yī)大學、南京大學,暨南大學,南京工業(yè)大學,曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標本齊全,有專門針對人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標本的試劑盒;另有針對各種動物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚)的科研試劑。
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