產(chǎn)品名稱:牛支原體PCR試劑盒
英文名稱:Mycoplasma bovisPCR
編號: FSP1937
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、產(chǎn)品僅供科研制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
數(shù)據(jù)采集:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結合DNA 時,吸收光譜在 471nm,結合 DNA 時的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
GDIA1腫瘤轉移抑制基因GDIA1抗體特價促銷anti- MYH3 antibody輪狀病毒抗原快速檢測卡(檢豬、牛、犬糞便,20條/盒)印烏頭堿
GDIA2/ARHGDIB腫瘤轉移抑制基因GDIA2抗體特價促銷anti- MYH4-Specific antibody犬腺病毒抗原快速檢測卡(檢眼結膜分泌物,20條/盒)科羅索酸
G-CSFR/CD114粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子3受體抗體特價促銷anti- MYH6 antibody犬心絲蟲抗原快速檢測卡(檢血清/血漿/全血,20條/盒)姜黃素
GKRP葡萄糖激酶調節(jié)蛋白抗體特價促銷anti- MYH7-specific antibody豬肺炎支原體抗體檢測試劑盒積雪草酸
GDF-1生長、分化因子1抗體特價促銷anti- MYH9 antibody豬衣原體抗體檢測試劑盒日本蟾蜍毒苷元
GDF3生長分化因子3抗體特價促銷anti- Myh9 antibody豬輪狀病毒抗體檢測試劑盒歐夾竹桃苷
GDF8/MSTN生長分化因子8抗體特價促銷anti- Myh9 antibody豬乙腦病毒抗體檢測試劑盒蟾毒靈
GDF8生長分化因子8/肌肉抑制素抗體特價促銷anti- MYH9 antibody豬細小病毒抗體檢測試劑盒酯蟾毒配基,蟾力蘇
牛支原體PCR試劑盒beta-Gal Reporter Gene Assay, chemiluminescentPhospho-Beta-Catenin (Thr41/Ser45) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 2-己基癸酸18-Crown-6 18-冠醚-6
Nitric Oxide, Colorimetric Assayphospho-Beta-catenin(Tyr86) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 2,3-二氮雜萘鬼筆環(huán)肽
High Prime DNA Labeling KitCatalase 過氧化氫酶抗體 3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)甲苯D-Raffinose 棉籽糖
DIG Luminescent Detection Kit 地高辛發(fā)光檢測試劑盒NEK6 高度相似的細胞周期蛋白激酶NEK6抗體 (R)-(-)-3-喹寧醇D-Raffinose 棉籽糖
Nitrite/Nitrate, Colorimetric TestMRG15 轉錄調控因子MRG15抗體 二異丙苯(異構體混合物)D(+)Galactosamine hydrochlorideD-氨基半乳糖 Sigma
DIG Nucleic Acid Detection Kit 地高辛核酸檢測試劑盒MLL5 髓系/淋巴混合譜系白血病蛋白5抗體 芐氧羰基-N-芐基-Beta-丙氨酸D(+)Galactosamine hydrochlorideD-氨基半乳糖 Sigma
alpha-Glucosidase AssayJUP/Cateninma γ γ連環(huán)蛋白抗體(Catenin γ , γ鏈接素) 2-叔丁基環(huán)己基乙酸酯D-Aspartic acid D-天冬氨酸/D-天門冬氨酸
DIG DNA Labeling Kit 地高辛DNA標記試劑盒roche公司產(chǎn)品phospho-JUP(Tyr550) 磷酸化γ連環(huán)蛋白抗體 反式4-甲基環(huán)己胺Eriochrome Black T 鉻黑 T
關鍵字: 牛支原體;PCR試劑盒;50T;FSP1937;
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