探針法牛支原體實(shí)時定量PCR試劑盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma Bovis

貨號：Mqt-bov-20      規(guī)格：20個反應(yīng)

貨號：Mqt-bov-50      規(guī)格：50個反應(yīng)

貨號：Mqt-bov-100     規(guī)格：100個反應(yīng)

儲存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反復(fù)凍融。

試劑盒特點(diǎn)：

1，  特異性檢測牛支原體，與其他生物無交叉反應(yīng)。

2，  靈敏度高，最低檢測極限相當(dāng)于反應(yīng)液中約含1個CFU。

3，  使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力強(qiáng)和熱穩(wěn)定性好的特點(diǎn)；采用熱啟動方式，可抑制非特異性擴(kuò)增，降低背景熒光。

4，  帶有陽性對照樣品，可用于檢驗(yàn)試劑盒有效性。

5，  帶有UDG酶和dUTP，可降低殘留DNA的污染。

牛支原體（Mycoplasma Bovis）是牛傳染性支原體肺炎（又稱牛爛肺?。┑牟≡w，是最重要的致病性牛寄生支原體，呈全球流行趨勢，可引起肺炎、關(guān)節(jié)炎、乳腺炎、中耳炎、結(jié)膜炎、生殖紊亂和流產(chǎn)等多種疾病，發(fā)病率達(dá)到60%-100%，病死率不高，但有時會造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。在健康或患病的牛身上均可發(fā)現(xiàn)牛支原體，其疾病表現(xiàn)和對治療和疫苗的反應(yīng)常發(fā)生變化，診斷和控制較為困難，因此其流行程度常被低估。

牛支原體的檢測方法包括：體外培養(yǎng)法，血清學(xué)方法，和遺傳學(xué)方法。牛支原體的體外培養(yǎng)條件較為苛刻，用時較長，有時甚至要兩周時間，并且需要特定的方法來進(jìn)行鑒定，容易受到其他呼吸道病原體的干擾。血清學(xué)方法則必須在感染一段時間之后才能檢測，存在檢測時間的延遲，此外，實(shí)驗(yàn)室菌株和野外分離獲得的菌株存在抗原和遺傳學(xué)上的變異，對檢測形成了干擾。因此，高靈敏度和高特異性的PCR法是更好的選擇，其檢測時間短，僅需幾個小時即可獲得結(jié)果。定量PCR法與普通PCR法相比，不僅可以精確定量，而且操作更為方便，更少受環(huán)境污染的影響。

由于受到無乳支原體及其他一些近親支原體的干擾，基于16S rRNA基因的PCR方法往往無法準(zhǔn)確鑒別牛支原體?；贒NA復(fù)制修復(fù)基因uvrC的PCR方法可以對這些支原體進(jìn)行特異性區(qū)分，而且該基因十分穩(wěn)定，很少發(fā)生變異，因此本試劑盒選擇uvrC基因作為靶點(diǎn)對牛支原體進(jìn)行PCR鑒定，經(jīng)BLAST驗(yàn)證，具有非常好的特異性，與其他生物的基因組無交叉反應(yīng)。通過檢測10種近親支原體和21種常見細(xì)菌，以及19個健康牛肺組織，未見假陽性結(jié)果，可見本試劑盒對牛支原體具有特異性。對385個組織樣品的檢測表明，本試劑盒與培養(yǎng)法檢測結(jié)果完全一致。

本試劑盒包含熱啟動DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探針、陽性對照品、ROX染料，和用以防止殘余DNA污染的UDG（Uracil-?DNA?Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用戶只需準(zhǔn)備好DNA樣品即可使用。

本試劑盒采用的DNA聚合酶源自極端嗜熱菌（Thermus thermophilus），經(jīng)改造后較普通的Taq酶具有更強(qiáng)的抗抑制能力和熱穩(wěn)定性。通過結(jié)合特異性單克隆抗體，在室溫下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循環(huán)的熱變性階段，抗體受熱被去除，此時DNA聚合酶活性恢復(fù)，因此獲得“熱啟動”功能。熱啟動可減少殘余DNA的污染，提高PCR擴(kuò)增效率、靈敏度和目的片段產(chǎn)量。

本產(chǎn)品僅供研究使用。

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