PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱：肺炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱：MetaRTPCR
編號(hào)： FSP1880
分類：PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見(jiàn)下步），每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
數(shù)據(jù)采集：
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時(shí)，吸收光譜在 471nm，結(jié)合 DNA 時(shí)的吸收光譜在 500nm，發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品濃度的 log 為橫軸，以 Ct 值為縱軸，通過(guò)待測(cè)樣品的 Ct 值計(jì)算出樣品 DNA 的濃度。
EEF2真核翻譯延長(zhǎng)因子2抗體特價(jià)促銷anti- MBL2 antibodyTRP高效液相色譜電化學(xué)定量檢測(cè)試劑盒S100A13抗體
Phospho-EEF2 (Thr56)磷酸化真核翻譯延長(zhǎng)因子2抗體特價(jià)促銷anti- MBNL3 antibody細(xì)胞5-羥色胺-N-乙?；D(zhuǎn)移酶（Serotonin N-Acetyltransferase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白1抗體
EEF2k真核延伸因子激酶2抗體特價(jià)促銷anti- MBP tag antibody組織5-羥色胺-N-乙?；D(zhuǎn)移酶（Serotonin N-Acetyltransferase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒磷酸化染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)１抗體
Phospho-EEF2k (Ser366)磷酸化真核延伸因子激酶2抗體特價(jià)促銷anti- MBP-Tag antibody酵母5-羥色胺-N-乙?；D(zhuǎn)移酶（Serotonin N-Acetyltransferase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒促黃體激素誘導(dǎo)蛋白抗體
Alpha B Crystallin/HSPB5熱休克蛋白β5抗體特價(jià)促銷anti- MBTD1 antibody藍(lán)藻5-羥色胺-N-乙?；D(zhuǎn)移酶（Serotonin N-Acetyltransferase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒磺酰脲類藥物受體1抗體
EGFR表皮生長(zhǎng)因子受體抗體特價(jià)促銷anti- MC3R antibody細(xì)菌5-羥色胺-N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶（Serotonin N-Acetyltransferase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒磷酸化Smad2抗體
Phospho-EGFR(Ser991)磷酸化表皮生長(zhǎng)因子受體抗體特價(jià)促銷anti- MCC antibody羥基吲哚氧甲基轉(zhuǎn)移酶（hydroxyindole-O-methyltransferase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒2型豬鏈球菌菌體蛋白抗體
Phospho-EGFR (Thr678)磷酸化表皮生長(zhǎng)因子受體抗體特價(jià)促銷anti- MCCC1 antibody色氨酸羥化酶 （Tryptophan Hydroxylase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒S腺苷L-同型半胱氨酸水解酶抗體
肺炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒BROMOCRESOL GREEN, FREE ACID溴甲酚綠PCDHGA4 原鈣粘蛋白γA4抗體 5(6)-氨基熒光素Hoechst 33342/PI雙染試劑盒
BROMOCRESOL GREEN, FREE ACID溴甲酚綠PCDHGA2 原鈣粘蛋白γA2抗體 氯羰基亞磺酰氯吖啶橙(AO)-EB雙染色試劑盒
MTT、噻唑蘭、Thiazolyl BluePCDHGA3 原鈣粘蛋白γA3抗體 1,2,4,5-環(huán)己烷四甲酸二酐吖啶橙(AO)-EB雙染色試劑盒
O-NITROPHENYL B-D-GALACTOPYRAN（ONPG）鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷PCDHGA5 原鈣粘蛋白γA5抗體 5-乙基-4-羥基-2-甲基-3(2H)-呋喃酮吖啶橙（AO）熒光染色試劑盒
O-NITROPHENYL B-D-GALACTOPYRAN（ONPG）鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷PCDHGA7 原鈣粘蛋白γA7抗體 L-環(huán)己基丙氨酸吖啶橙染色液(1mg/mL)
TTC2,3,5-氯化三苯基四氮唑PCDHGA8 原鈣粘蛋白γA8抗體 咪唑并[1,2-a]嘧啶AnnexinV Alexa Fluor647/PI 凋亡檢測(cè)試劑盒
TTC2,3,5-氯化三苯基四氮唑PCDHGA9 原鈣粘蛋白γA9抗體 反-4-氨基環(huán)己醇AnnexinV Alexa Fluor647/PI 凋亡檢測(cè)試劑盒
TTC2,3,5-氯化三苯基四氮唑ASPP2/p53BP2 P53凋亡刺激蛋白2抗體 2-苯氨基-3-甲基-6-二丁氨基熒AnnexinV Alexa Fluor647/PI 凋亡檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關(guān)鍵字： 肺炎病毒;PCR檢測(cè)試劑盒;50T;FSP1880;
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.，China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營(yíng)產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測(cè)試劑盒、分光光度法檢測(cè)試劑盒、熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞株、原代細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.，China)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué)，暨南大學(xué)，南京工業(yè)大學(xué)，曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒，種屬標(biāo)本齊全,有專門針對(duì)人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標(biāo)本的試劑盒；另有針對(duì)各種動(dòng)物（鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚）的科研試劑。
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