利那洛肽概述理化性質(zhì)作用機(jī)制藥效學(xué)藥代動(dòng)力學(xué)用法及用量制備方法應(yīng)用不良反應(yīng)注意事項(xiàng)參考資料專題中文名稱:利那洛肽中文同義詞:利那洛肽原料;利那洛肽;利那洛肽,醋酸利那洛肽;醋酸利那洛肽851199-59-2;醋酸利那洛肽;利那洛肽-多肽原料委托生產(chǎn);利那洛肽-多肽制劑一致性評(píng)價(jià);LINACLOTIDE利那洛肽英文名稱:Linaclotide英文同義詞:Linacllotide;Linaclotide;LinaelotideAcetate;Linaelotide;CY-14CAS號(hào):851199-59-2分子式:C59H79N15O21S6分子量:1526.73646EINECS號(hào):相關(guān)類別:生物制藥;多肽原料藥;醫(yī)藥中間體;多肽;醫(yī)藥原料藥;原料藥;Inhibitors;醫(yī)用原料Mol文件:851199-59-2.mol利那洛肽性質(zhì)沸點(diǎn)2045.0±65.0°C(Predicted)密度1.60酸度系數(shù)(pKa)3.05±0.10(Predicted)利那洛肽用途與合成方法概述利那洛肽，又名醋酸利那洛肽，商品名為L(zhǎng)inzess。是一種含有14個(gè)氨基酸的合成肽類結(jié)構(gòu)，與內(nèi)源性鳥苷肽家族相關(guān)，是FDA唯一批準(zhǔn)的可用于臨床的腸道局部起效的GC-C（鳥苷酸環(huán)化酶-C）激動(dòng)劑類藥物，可用于治療便秘型腸易激綜合征（IBS-C）和慢性特發(fā)性便秘（CIC）成年患者。理化性質(zhì)白色至灰白色無(wú)定形粉末;微溶于水和氯化鈉水溶液(0.9%)。圖1為利那洛肽作用機(jī)制利那洛肽是一種鳥苷酸環(huán)化酶-C受體激動(dòng)劑（GCCA），同時(shí)具有內(nèi)臟鎮(zhèn)痛效應(yīng)和內(nèi)分泌活性。利那洛肽及其活性代謝產(chǎn)物都可以與小腸上皮管腔表面的鳥苷酸環(huán)化酶-C（GC-C）受體結(jié)合。在動(dòng)物模型中，通過(guò)GC-C的活化，利那洛肽可以減輕內(nèi)臟疼痛，提高胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)速度，在人類中，該藥物也可以提高結(jié)腸的轉(zhuǎn)運(yùn)速度。GC-C活化的結(jié)果即細(xì)胞內(nèi)外cGMP（環(huán)鳥苷酸）濃度升高。細(xì)胞外cGMP可以降低疼痛神經(jīng)纖維的活性，可減輕模型動(dòng)物的內(nèi)臟疼痛。細(xì)胞內(nèi)cGMP可通過(guò)激活CFTR（囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子），增加小腸腔內(nèi)氯化物和碳酸氫鹽的分泌量，最終導(dǎo)致小腸液分泌增多和小腸轉(zhuǎn)運(yùn)速度增快。藥效學(xué)雖然在臨床研究中尚未在人中完全評(píng)價(jià)LINZESS的藥理學(xué)效應(yīng)，LINZESS曾顯示用Bristol糞便形成計(jì)分(BSFS)和增加糞便頻數(shù)測(cè)定大便的一致性變化。藥代動(dòng)力學(xué)吸收：口服給藥后LINZESS吸收少生物利用度低。口服劑量145μg或290μg給藥后利那洛肽及其活性代謝物的濃度血漿中低于定量低限。因此，不能計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)例如曲線下面積(AUC)，最高濃度(Cmax)，和半衰期(t?)。分布：鑒于利那洛肽治療的口服劑量的血藥濃度，是無(wú)法衡量的，預(yù)計(jì)利那洛肽分布至組織很少。代謝：利那洛肽在胃腸道內(nèi)通過(guò)丟失末端酪氨酸部分被代謝為其主要，活性代謝物。利那洛肽及其代謝物在小腸腔內(nèi)被蛋白解降解為較小肽和天然存在氨基酸。消除：進(jìn)食和空腹受試者每天給予290μg的LINZESS共7天后在糞樣品中回收活性肽平均約5%(空腹)和約3%(進(jìn)食)和實(shí)際上所有為活性代謝物。食物影響：在一項(xiàng)交叉研究中，18例健康受試者在進(jìn)食和非進(jìn)食狀態(tài)給予LINZESS290μg共7天。血漿中沒(méi)有檢測(cè)到利那洛肽活其活性代謝物。在高脂肪早餐后立即服用LINZESS比空腹?fàn)顟B(tài)服用導(dǎo)致松散便和排便頻數(shù)較高[見劑量和給藥方法(2.1，2.2)]。在臨床試驗(yàn)中，在早餐前至少30分鐘空胃給予LINZESS。用法及用量該藥膠囊劑型，口服給藥，每日一次。它可以緩解IBS-C導(dǎo)致的疼痛和便秘癥狀，以及CIC患者的便秘及排便困難表現(xiàn)。藥物的推薦治療劑量為：便秘型腸易激綜合征患者290微克；慢性特發(fā)性便秘患者145微克。每日首次進(jìn)餐30分鐘之前服用。制備方法半選擇性氧化形成三對(duì)二硫鍵合成利那洛肽利用Fmoc固相合成策略,Wang樹脂為載體合成了3條[4Trt＋2Acm]和3條[2Trt＋4Acm]利那洛肽的線性前體化合物,在裂解樹脂的同時(shí)脫去半胱氨酸上的Trt保護(hù)基,使用氯化血紅素催化氧化的方法形成部分二硫鍵.下一步反應(yīng),使用了二苯亞砜[PhS(O)Ph]/三甲基氯硅烷(CH3SiCl3)體系,在TFA中脫除Acm保護(hù)基并形成剩余的二硫鍵.合成的6條線性前體肽中,有3條可以較高轉(zhuǎn)化率得到利那洛肽,成功的將Acm保護(hù)的半胱氨酸應(yīng)用于利那洛肽的合成中。（1）多肽的合成第1個(gè)氨基酸與樹脂的偶聯(lián)：稱取Wang樹脂（1g，0.72mmol/g）于25ml固相反應(yīng)器中，用15mlCH2Cl2溶脹2h。稱取Fmoc-Tyr（tBu）（0.99g，2.16mmol）、HBTU（0.82g，2.16mmol）、HOBT（0.29g，2.16mmol）溶于15mlDMF中，加入DIEA（1.82ml，11.04mmol）活化后加入固相反應(yīng)器中，在室溫下?lián)u床震蕩反應(yīng)3h。加入乙酸酐∶吡啶∶DMF=2∶1∶3（V/V/V）（1×30min）進(jìn)行封閉，依次用DMF（4×1min）、CH2Cl2（4×1min）、DMF（4×1min）洗滌樹脂。剩余氨基酸的偶聯(lián)：按照利那洛肽的氨基酸序列，重復(fù)上述步驟進(jìn)行偶聯(lián)和脫Fmoc，每接完1個(gè)氨基酸以后，用Kasier試劑進(jìn)行檢測(cè)，脯氨酸（Pro）用溴酚藍(lán)法檢測(cè)，顯色反應(yīng)為陰性則進(jìn)入下一個(gè)偶聯(lián)循環(huán)，否則重復(fù)偶聯(lián)步驟。多肽的裂解：完成偶聯(lián)后，稱取多肽樹脂放入反應(yīng)瓶中，按照1g樹脂5ml裂解劑的比例配置裂解液，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入TFA∶水∶苯甲硫醚∶苯酚∶EDT=82.5∶5∶5∶5∶2.5（V/V/V/V/V）裂解2h后抽濾，加少量TFA和CH2Cl2洗滌3次，合并濾液，將得到的濾液用氮?dú)獯等?/4體積后，滴入大量的冰乙醚中析出白色絮狀沉淀，離心得到相應(yīng)的粗肽。（2）多肽的純化及分析將得到的粗肽溶于少量水,用Waters600半制備液相,XB-C18制備柱進(jìn)行純化.高效液相條件,流動(dòng)相A:水(含體積分?jǐn)?shù)為0.1%的TFA);流動(dòng)相B:乙腈(含體積分?jǐn)?shù)為0.1%的TFA);流動(dòng)相梯度:流動(dòng)相B15%～50%(體積分?jǐn)?shù)),20min;流速為3mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)220nm.收集主峰,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙腈,凍干得到多肽純品。（3）二硫鍵的形成氯化血紅素催化氧化形成二硫鍵:稱取脫除Trt保護(hù)基的利那洛肽線性前體肽(3mg,2μmol),溶于pH＝8.0的Tris-HCl的緩沖溶液(5mL)中,加入20%(物質(zhì)的量比)的氯化血紅素(含少量DIEA),室溫敞口攪拌2h,反應(yīng)結(jié)束用HPLC分析.PhS(O)Ph/CH3SiCl3脫Acm保護(hù)基并形成二硫鍵:稱取多肽(0.6mg,0.4μmol),溶于TFA(0.4mL)中,加入CH3SiCl3(12μL,250equiv.),PhS(O)Ph(0.8mg,10equiv.),苯甲醚(4.3μL,100equiv.),室溫敞口攪拌20min加入干燥乙醚(10mL),4mol/L醋酸(5mL)震蕩,取水相進(jìn)行HPLC分析并分離。