"hCMEC/D3細(xì)胞：永生化人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞系
細(xì)胞背景資料：腦微血管；內(nèi)皮細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞生長(zhǎng)：貼壁
細(xì)胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細(xì)胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細(xì)胞來源說明：細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系
細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁
為什么培養(yǎng)的細(xì)胞要及時(shí)傳代？體外培養(yǎng)的細(xì)胞大多具有生長(zhǎng)接觸抑制的特性，也就是說當(dāng)一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞包圍的時(shí)候，它就會(huì)停止生長(zhǎng)，及時(shí)傳代后，細(xì)胞的生長(zhǎng)得以繼續(xù)。培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些？可能的原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷眈肢或生長(zhǎng)因子等耗盡或缺乏或己被破壞；培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；試劑保存不當(dāng)；比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清等，找出其它可能的原因。解決辦法：增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度；讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；換入新鮮配制培養(yǎng)液；補(bǔ)加谷酷肢或生長(zhǎng)因子等；用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，去棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌；血清需保存在５℃到２０℃; 培養(yǎng)液需在２-８℃避光保存;含血清完全培養(yǎng)液在２-８℃保存，并在２周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。冷凍管應(yīng)如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入３７℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在１-２分鐘內(nèi)大部分融化，特別注意，需殘留一小塊冰塊，就可拿到超凈工作臺(tái)操作細(xì)胞，用７５%酒精消毒凍存管，用新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管爆裂。
細(xì)胞凍存復(fù)蘇材料與方法步驟：常用的細(xì)胞冷凍貯存器為液氮貯存器，規(guī)格有３５L和５０L兩種。使用時(shí)要注意以下幾點(diǎn)：(１)一般兩周需充液氮一次，至少一個(gè)月充氮一次。液氮溫度達(dá)-１９６℃，使用時(shí)注意勿讓液氮濺到皮膚上，以免引起凍傷。(２)液氮容器為雙層結(jié)構(gòu)，中間為真空層，瓶口有雙層焊接處，應(yīng)防止焊接部裂開。(３)在裝入液氮時(shí)，要注意緩慢小心，并用厚紙卷筒或特制漏斗作引導(dǎo)，使液氮直達(dá)瓶底，如有專用液氮灌注裝置則更好。若為初次使用，加液氮時(shí)更要緩慢，以免溫度驟降而使容器損壞。細(xì)胞凍存時(shí)常備的材料有：０.２５%胰蛋白酶，含１０%～２０%的血清培養(yǎng)液，DMSO(分析純)或無色新鮮甘油(１２１°C蒸氣高壓消毒)，２mL安瓿(或?qū)Ｓ眉?xì)胞凍存管)、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為：(１)選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，在凍存前一天換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng) 液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞，使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(１０００r/min，１０分鐘)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培養(yǎng)基，于４℃預(yù)冷１５分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，細(xì)胞濃度為３×１０６～１×１０７/mL之間。(３)將上述細(xì)胞分裝于安瓿或?qū)Ｓ美鋬鏊芰瞎苤校碴逞b１～１.５mL在火焰噴燈上封口，封口處要完全封閉，圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期，同時(shí)作好登記(日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù))。(４)將裝好細(xì)胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi);置于液氮容器頸口處存放過夜，次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：先將安瓿置入４℃冰箱中２～３小時(shí)，再移至冰箱冷凍室內(nèi)３～４小時(shí)，再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放２小時(shí)，最后沉入液氮中。細(xì)胞凍存在液氮中可以長(zhǎng)期保存，但為妥善起見，凍存半年后，取出一只安瓿細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察生長(zhǎng)情況，然后再繼續(xù)凍存。
細(xì)胞傳代的一般方法：開始細(xì)胞傳代前，仔細(xì)檢查細(xì)胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全：一般主要有：細(xì)胞(單層細(xì)胞，鏡檢適合)、培養(yǎng)液(MEM-０.２%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或１９９等適合細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)、滅活小牛血清、慶大霉素溶液（１萬單位）、７.５％NaHC０３溶液、０.２５％胰蛋白酶、PBS洗液。用具：小方瓶(１００m１)、克氏瓶、膠塞、吸管(１０ml、１m１）、細(xì)胞吹打管（２０ml）(以上用具需經(jīng)１２１℃至少１５分鐘高壓滅菌)、C０２ 孵箱、超凈臺(tái)、倒置顯微鏡、４℃、-２０℃冰箱；操作步驟：鏡檢細(xì)胞，挑選生長(zhǎng)狀態(tài)良好，細(xì)胞界限清晰，具有立體感，形態(tài)好無污染、無異常及可疑病變細(xì)胞。配制細(xì)胞培養(yǎng)液：按以下配比配制MEM-０.２%LH培養(yǎng)液１００ml內(nèi)，加入滅活小牛血清１０m１，慶大霉素溶液０.３m１，７.５%碳酸鈉溶液３ml。（僅供一般參考）。消化細(xì)胞；先用PBS洗液沖洗細(xì)胞表面１-２次，每次１０m１，棄去洗液，向細(xì)胞瓶?jī)?nèi)加入０.２５％胰蛋白酶溶液，每瓶１m１，細(xì)胞瓶平放，使消化液完全覆蓋細(xì)胞表面。至細(xì)胞完全脫落到胰酶中。每瓶加入１０m１細(xì)胞培養(yǎng)液吹打分散細(xì)胞，按所需的傳代比例分裝于小方瓶(１００m１)中，再加入１０m１細(xì)胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝，然后補(bǔ)加至所需培養(yǎng)量。加塞，置于３７±１℃孵箱培養(yǎng)。約２～４天成片。(由細(xì)胞接種濃度決定)；填寫傳代記錄。
CEM-T4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA-MB 468細(xì)胞、OCI-AML-2細(xì)胞、MDCK (NBL-2)細(xì)胞
ANA-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RBE4細(xì)胞、Rat 2細(xì)胞、NCI-460細(xì)胞
NPC-TW 01細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-OV-3細(xì)胞、V79-4細(xì)胞、BLO11細(xì)胞
Gejiu Lung Carcinoma-82細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H1395細(xì)胞、87 MG細(xì)胞、OCILY-3細(xì)胞
SiHa細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW 620細(xì)胞、HCT8細(xì)胞、A.704細(xì)胞
SUDHL-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LP-1細(xì)胞、SK-N-BE-2細(xì)胞、8226細(xì)胞
H735細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs 934.T細(xì)胞、IPLB-Sf21AE細(xì)胞、CAL 12細(xì)胞
NRK-52E細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Wistar Institute, Susan Hayflick細(xì)胞、Mia PACA 2細(xì)胞、PC9細(xì)胞
BLO11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H508細(xì)胞、H522細(xì)胞、C918細(xì)胞
SW 13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CCD18Co細(xì)胞、UMUC-14細(xì)胞、CAOV4細(xì)胞
HCASMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NR-8383細(xì)胞、J-774細(xì)胞、MA-104細(xì)胞
Z138細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H520細(xì)胞、HeLa 229細(xì)胞、KATOIII細(xì)胞
SU-DHL-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KTA7細(xì)胞、KOSC-2 cl3-43細(xì)胞、Rainbow Trout Embryo細(xì)胞
SK-RC 42細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW 13細(xì)胞、Hs 870.T細(xì)胞、USMC細(xì)胞
H-220細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Cor L51細(xì)胞、SV-HUC-1細(xì)胞、PK 15細(xì)胞
MDA 435細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SP2細(xì)胞、A-375.S2細(xì)胞、T47D細(xì)胞
MDA 435細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SP2細(xì)胞、A-375.S2細(xì)胞、T47D細(xì)胞
B16F1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：870細(xì)胞、IPLB-Sf21細(xì)胞、BALB/3T3 cl. A31細(xì)胞
MGH-U3 (RN)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：P3X63Ag8細(xì)胞、MCF-10 Attached細(xì)胞、BV-173細(xì)胞
FRO細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H441-4細(xì)胞、hUC-MSC細(xì)胞、H716細(xì)胞
Co 115細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：COLO829細(xì)胞、JHH7細(xì)胞、NCIH1688細(xì)胞
HLF-a細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TW01細(xì)胞、MDAMB330細(xì)胞、COLO.205細(xì)胞
High-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH446細(xì)胞、CL-40細(xì)胞、HCC-1359細(xì)胞
C33A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH1770細(xì)胞、HCC2157細(xì)胞、Chinese Hamster Ovary細(xì)胞
OCI-Ly 3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：32Dc3細(xì)胞、LA 4細(xì)胞、SR-786細(xì)胞
OCI Ly19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-3255細(xì)胞、M-20細(xì)胞、HCC70細(xì)胞
MS751細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：INS1細(xì)胞、EJ 138細(xì)胞、HEK-293 c18細(xì)胞
K-562細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GFP-Olig2細(xì)胞、Colo205細(xì)胞、H3255細(xì)胞
LAN5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW 1463細(xì)胞、293GP細(xì)胞、H295細(xì)胞
Porcine Kidney-15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PLA801C細(xì)胞、LS-1034細(xì)胞、8305C_1細(xì)胞
Farage細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NRK clone 52E細(xì)胞、NTera2/D1細(xì)胞、H-1522細(xì)胞
HSC3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Panc3_27細(xì)胞、NCI-H498細(xì)胞、HuTu-80細(xì)胞
CV-1 in Origin Simian-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MCF-7/ADR細(xì)胞、U937細(xì)胞、Vero C1008細(xì)胞
MCM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：P-36細(xì)胞、C3H 10T1/2細(xì)胞、MFE280細(xì)胞
NCIH295R細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TI-73細(xì)胞、NCIH1755細(xì)胞、NCI-H2591細(xì)胞
HOS/MNNG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-2347細(xì)胞、Centre Antoine Lacassagne-51細(xì)胞、JROECL19細(xì)胞
OV1063細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KYSE-30細(xì)胞、Colon38細(xì)胞、KMS-18細(xì)胞
SK-MEL-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SNU638細(xì)胞、Mouse Bladder Tumor line-2細(xì)胞、CCD 841 CoN細(xì)胞
OVCAR 433細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：COLO394細(xì)胞、SMMC7721細(xì)胞、RPMI 8226細(xì)胞
C166細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MD Anderson-Metastatic Breast-175-VIII細(xì)胞、NCI-SNU-601細(xì)胞、NCI-H847細(xì)胞
UMC-11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Human Embryo Kidney-2細(xì)胞、TSCCa細(xì)胞、SNU-620細(xì)胞
H524細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MN-60細(xì)胞、H1781細(xì)胞、GM3569細(xì)胞
CEM T4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：DHL5細(xì)胞、Douglas Foster-1細(xì)胞、NPA 87細(xì)胞
HOP 92細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：WiDr/S細(xì)胞、624mel細(xì)胞、DI-TNC1細(xì)胞
HaCaT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HO-1-N-1細(xì)胞、Be Wo細(xì)胞、MGSMC細(xì)胞
Mono-Mac-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KP-N-NS細(xì)胞、OSA細(xì)胞、P 815細(xì)胞
COLO 320F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：G-402細(xì)胞、IAR-20細(xì)胞、Immortalized Human Hepatocytes細(xì)胞
HMC-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ML-2細(xì)胞、NCI-H711細(xì)胞、H35 Reuber細(xì)胞
Hs819T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HS-766-T細(xì)胞、U2OS細(xì)胞、INS1-E細(xì)胞
MSB-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：WEHI3細(xì)胞、MC57細(xì)胞、NBL-5細(xì)胞
ECC 10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LC1-Sq細(xì)胞、HCC-2218細(xì)胞、HEEpiC細(xì)胞
HMSC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：A2780CP細(xì)胞、SNU-387細(xì)胞、KU.812細(xì)胞
X63-Ag8.653細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LU451細(xì)胞、H-196細(xì)胞、SHIN3細(xì)胞
Medical Research Council cell strain-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SupT1細(xì)胞、G 292 Clone A 141B1細(xì)胞、IR983F細(xì)胞
HUVEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：QG-56細(xì)胞、HCC0078細(xì)胞、CL1-5細(xì)胞
NCI-H1155細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-146細(xì)胞、MDCK-II細(xì)胞、RSMC細(xì)胞
NOZAWA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ME180細(xì)胞、NCI-SNU-878細(xì)胞、HepaRG細(xì)胞
Vx2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：697細(xì)胞、NCIH2196細(xì)胞、Psi-2 DAP細(xì)胞
HECV細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CCD 19Lu細(xì)胞、NCTC 3960細(xì)胞、PANC-28細(xì)胞
HRCEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Calu3細(xì)胞、McArdle RH-7777細(xì)胞、OCI-Ly 10細(xì)胞
MDAMB436細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW-1990細(xì)胞、UMR-106細(xì)胞、SJRH-30細(xì)胞
NCI-H1930細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TCC Sup細(xì)胞、Hs695細(xì)胞、NCI-H1793細(xì)胞
OC316細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：COLO320HSR細(xì)胞、WEHI-279細(xì)胞、Human Embryo Kidney-2細(xì)胞
Ly18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH28細(xì)胞、TC-1 [Mouse lung]細(xì)胞、P3.times.63 Ag8.653細(xì)胞
JROECL33細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LS-411N細(xì)胞、HEK AD293細(xì)胞、OCI-AML5細(xì)胞
TE-85 clone 5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TE6細(xì)胞、MRC-5細(xì)胞、FT-293細(xì)胞
Be-Wo細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BC-022細(xì)胞、SIRC細(xì)胞、3T3(A31)細(xì)胞
COLO320-DM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HuO9細(xì)胞、RBMEC細(xì)胞、Cloudman S91 melanoma clone M-3細(xì)胞
C-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MRC9細(xì)胞、JIMT細(xì)胞、GM-637細(xì)胞
4T1.2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SHG-44細(xì)胞、143 B細(xì)胞、Colon26細(xì)胞
MCF-7/ADR-RES細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PT67細(xì)胞、SMA 560細(xì)胞、C32 [Human melanoma]細(xì)胞
BNL CL2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BT 20細(xì)胞、MCA205細(xì)胞、Hs 870.T細(xì)胞
NPC-TW 01細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-OV-3細(xì)胞、LNCaP-C4-2細(xì)胞、H-2342細(xì)胞
NCIH2085細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：IPI-2I細(xì)胞、OCI-AML3細(xì)胞、KHYG細(xì)胞
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