"MDA-MB-435S細(xì)胞：人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞系
細(xì)胞背景資料：MDA-MB-４３５S是一種紡錘形的細(xì)胞，１９７６年由其親本(４３５)中篩選得到。４３５是從３１歲的轉(zhuǎn)移性乳腺導(dǎo)管腺癌女性患者胸水中分離得到。當(dāng)用熒光染料對(duì)微管蛋白進(jìn)行染色時(shí)親本細(xì)胞顯現(xiàn)散布特征(II型)。最近通過cDNA陣列研究表明，親本(MDA-MB-４３５)可歸入黑素瘤起源。
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞生長(zhǎng)：貼壁
細(xì)胞物種來(lái)源：人源或鼠源等其它物種來(lái)源
細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細(xì)胞傳代方法：消化３-５分鐘，１：２,３天內(nèi)可長(zhǎng)滿
細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明：細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系
細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
解凍細(xì)胞常見實(shí)驗(yàn)問題分析及推薦解決方法：在解凍凍存細(xì)胞時(shí)，發(fā)現(xiàn)會(huì)出現(xiàn)存活率低、大量細(xì)胞碎片及生長(zhǎng)緩慢等問題，究竟是什么原因?qū)е?，我們?cè)撛趺催M(jìn)行解決？以下是國(guó)內(nèi)外細(xì)胞培養(yǎng)專家針對(duì)解凍細(xì)胞實(shí)驗(yàn)問題，總結(jié)的一些解決方案！出現(xiàn)低存活率的可能原因及推薦解決方案如下：１)解凍過程中細(xì)胞裂解，推薦的解決方案：可預(yù)期到一定量的細(xì)胞死亡，因此細(xì)胞的濃度應(yīng)足夠高，考慮到這一損失。起始濃度為１*１０(６)至１*１０(７)細(xì)胞/毫升；２)解凍過程中的問題，推薦的解決方案：在-７０℃至-８０℃下保存冷凍的培養(yǎng)物，保存時(shí)間為１-５天，但這不是保存的方法。在３７℃充分解凍后應(yīng)立即開始培養(yǎng)；３)對(duì)冷凍液過敏，推薦的解決方案：A.完全或部分更換培養(yǎng)基，減少培養(yǎng)基中冷凍液的量。在２４小時(shí)后更換培養(yǎng)液體可全部去除冷凍液。B.留出更多時(shí)間供培養(yǎng)物恢復(fù)。有時(shí)細(xì)胞需要幾周時(shí)間才能形成單層或密集的懸浮物，取決于冷凍時(shí)細(xì)胞的年齡或傳代次數(shù)或在生長(zhǎng)階段中的位置。冷凍的條件在對(duì)數(shù)期；４)被冷凍的原種細(xì)胞的年齡或冷凍時(shí)培養(yǎng)物的年齡，推薦的解決方案：解凍最近冷凍的細(xì)胞。細(xì)胞處于冷凍狀態(tài)的時(shí)間越長(zhǎng)，存活率越低。檢查冷凍細(xì)胞的時(shí)間和方法。在冷凍時(shí)細(xì)胞應(yīng)處于對(duì)數(shù)期。
傳代的操作步驟注意事項(xiàng)：1)操作前要洗手，進(jìn)入超凈臺(tái)后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。2)點(diǎn)燃酒精燈，操作在火焰附近進(jìn)行，耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼，金屬器械燒灼時(shí)間不能太長(zhǎng)，以免退火，并冷卻后才能夾取組織，吸取過營(yíng)養(yǎng)液的用具不能再燒灼，以免燒焦形成碳膜。3)操作動(dòng)作要準(zhǔn)確敏捷，但又不能太快，以防空氣流動(dòng)，增加污染機(jī)會(huì)。4)不能用手觸已消毒器皿的工作部分，工作臺(tái)面上用品要布局合理。5)瓶子開口后要盡量保持45℃斜位。6)吸溶液的吸管等不能混用。貼壁細(xì)胞傳代的操作步驟：1)吸除培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。2)向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許，以能覆滿瓶底為限。3)置溫箱中2-5分鐘，當(dāng)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大后，立即終止消化。4)吸除消化液，向瓶?jī)?nèi)注入Hanks液數(shù)毫升，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘余消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細(xì)胞時(shí)，動(dòng)作要輕，以免把已松動(dòng)的細(xì)胞沖掉流失，如用胰蛋白酶液?jiǎn)为?dú)消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液沖洗，直接加入培養(yǎng)液。5)用吸管吸取營(yíng)養(yǎng)液輕輕反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。6)計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，把細(xì)胞懸液分成等份分裝入數(shù)個(gè)培養(yǎng)瓶中，置溫箱中培養(yǎng)。懸浮細(xì)胞傳代的操作步驟：1)吸出細(xì)胞培養(yǎng)液，放入離心管中，離心1000rpm5分鐘。2)吸掉上清液，加入適量之新鮮培養(yǎng)基，混和均勻后，依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
其實(shí)絕大部分細(xì)胞消化的時(shí)候是只要用胰酶潤(rùn)洗一遍即可，吸去胰酶后，殘留的那些無(wú)法計(jì)算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在３７度一般不到２min足夠消化細(xì)胞(絕大部分１min不到)。對(duì)于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞，連續(xù)這樣傳代，對(duì)細(xì)胞傷害很大。簡(jiǎn)單的程序是PBS潤(rùn)洗吸去，胰酶潤(rùn)洗吸去，然后３７度消化；什么算是消化好了呢？不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動(dòng)了，多半呈沙壯移動(dòng)，其實(shí)已經(jīng)可以了，很多人喜歡把細(xì)胞消化或者吹打成完全分離細(xì)胞，這是沒有必要的。一般能移動(dòng)了，說(shuō)明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了，細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了，細(xì)胞已經(jīng)獨(dú)立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個(gè)時(shí)候應(yīng)該停止消化，不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。細(xì)胞就是完全成單個(gè)細(xì)胞懸液，之后在貼壁的過程中仍然會(huì)聚集，這個(gè)是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，尤其是腫瘤細(xì)胞的一個(gè)特性，無(wú)論死活的細(xì)胞都是如此，你可以嘗試，準(zhǔn)備１００%的單個(gè)細(xì)胞懸液，貼壁后觀察細(xì)胞，仍然是幾個(gè)幾個(gè)細(xì)胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此，容易聚集，不要去嘗試過幾個(gè)小時(shí)就拿出來(lái)吹打成單細(xì)胞懸液(不要笑，這個(gè)是初養(yǎng)懸浮細(xì)胞的人常犯的錯(cuò)誤，以為懸浮培養(yǎng)就是一個(gè)一個(gè)分開)。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來(lái)，這個(gè)時(shí)候即使是成片的(比如Calu-３細(xì)胞)，吹打不超過２０次后(一般１０次即可)，成小規(guī)模聚集(１０個(gè)細(xì)胞左右)，是正常的，不要試圖再去延長(zhǎng)消化時(shí)間，或者像有的同學(xué)那樣吹打１h，等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn)。
COLO 357細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MB-49細(xì)胞、PC 61-5-3細(xì)胞、AR42J細(xì)胞
NCI-H165細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H69C細(xì)胞、MC-4細(xì)胞、HPF細(xì)胞
H-719細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Caki2細(xì)胞、H1155細(xì)胞、HuT 102細(xì)胞
Tb 1 Lu (NBL-12)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：VMM-5A細(xì)胞、SU-DHL-2細(xì)胞、RASMCs細(xì)胞
Mo 59J細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GA-10 clone 4細(xì)胞、HuTu 80細(xì)胞、Ca759細(xì)胞
HUV-EC-C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：B16/F0細(xì)胞、H1184細(xì)胞、H2444細(xì)胞
LNCaP-FGC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CORL26細(xì)胞、NCI-H250細(xì)胞、RA 1細(xì)胞
NIE-115細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MRASMC細(xì)胞、Hs852細(xì)胞、L5178Y細(xì)胞
Panc 3.27細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：J774細(xì)胞、P3JHR-1細(xì)胞、HS852.T細(xì)胞
HOP62細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：UM-RC-2細(xì)胞、SK-OV-3細(xì)胞、Ku812F細(xì)胞
CF-1 MEF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Centre Antoine Lacassagne-62細(xì)胞、RM1細(xì)胞、NCI-H-82細(xì)胞
NG 108-15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM03569B細(xì)胞、MDA-MB-436細(xì)胞、A431細(xì)胞
hTERT RPE1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RPMI-8226細(xì)胞、MHCC97-H細(xì)胞、H-2108細(xì)胞
Pa16C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：F9細(xì)胞、Panc02-H0細(xì)胞、HO-8910 PM細(xì)胞
MS-751細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-1184細(xì)胞、COLO.205細(xì)胞、H847細(xì)胞
COLO 205細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H4-II-E細(xì)胞、SUM 102PT細(xì)胞、COLO_320DM細(xì)胞
COLO 205細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H4-II-E細(xì)胞、SUM 102PT細(xì)胞、COLO_320DM細(xì)胞
HIBEpiC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEK 293A細(xì)胞、Normal Rat Kidney-52E細(xì)胞、H2107細(xì)胞
Panc-327細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCEC-12細(xì)胞、SN12C細(xì)胞、SNU-C2B細(xì)胞
H-2196細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HTori 3細(xì)胞、PANC3.27細(xì)胞、C1R細(xì)胞
NIH3T3-L1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KE 37細(xì)胞、Hs294細(xì)胞、HCC38細(xì)胞
PA-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Becker細(xì)胞、NUGC-2細(xì)胞、NCIH1819細(xì)胞
PK 15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDCC-MSB1細(xì)胞、HCC95細(xì)胞、Panc 3.27細(xì)胞
H-1435細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：YD15細(xì)胞、H-2135細(xì)胞、OCI/AML2細(xì)胞
AG06814-N細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-838細(xì)胞、SKNO1細(xì)胞、TE8細(xì)胞
Institute for Medical Research-32細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA-415細(xì)胞、HCC1187細(xì)胞、COLO357細(xì)胞
HEK-293-FT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NP-69細(xì)胞、32D:cl3細(xì)胞、C3H/10T1/2-clone8細(xì)胞
Duke University 145細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：M619細(xì)胞、D-283 Med細(xì)胞、Japanese Tissue Culture-39細(xì)胞
B16-F1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Huh7.5.1細(xì)胞、PAN 02細(xì)胞、143B TK-細(xì)胞
PLCPRF5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SCL-II細(xì)胞、QBC939細(xì)胞、L929(NCTC)細(xì)胞
Hs27F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LWnt3A細(xì)胞、IPLB-Sf21-AE細(xì)胞、HLEpiC細(xì)胞
RPMI2650細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H747細(xì)胞、HEC-1-A細(xì)胞、HS688AT細(xì)胞
LS411細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-2195細(xì)胞、NCI-H1668細(xì)胞、HCC1954細(xì)胞
293S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CL-34細(xì)胞、LC1sq細(xì)胞、RBL-2H3細(xì)胞
WiDr/S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：WERI-Rb1細(xì)胞、MDCK (NBL-2)細(xì)胞、Hs-343-T細(xì)胞
LIM1215細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC44細(xì)胞、HL60細(xì)胞、MDAMB468細(xì)胞
Human Epidermoid carcinoma #2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC1569細(xì)胞、NBL-4細(xì)胞、NS20Y細(xì)胞
Human Epidermoid carcinoma #2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC1569細(xì)胞、NBL-4細(xì)胞、NS20Y細(xì)胞
AgC11x3A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Cloudman M3細(xì)胞、SUM 102細(xì)胞、NTera 2/cl.D1細(xì)胞
CTX TNA2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：JB-6 Cl 30細(xì)胞、USMC細(xì)胞、C-32細(xì)胞
Mevo細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Sci-1細(xì)胞、BxPC-3細(xì)胞、MDA2B細(xì)胞
RC-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HR-1細(xì)胞、HPDE細(xì)胞、OKT3細(xì)胞
SK-Mel 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs 683細(xì)胞、KYSE 140細(xì)胞、Murine Leydig Tumor細(xì)胞：-1細(xì)胞
COLO 829細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：F81細(xì)胞、Swiss3T3細(xì)胞、SK-UT-1細(xì)胞
HTori 3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：P3.653細(xì)胞、MEC1細(xì)胞、PGLH7細(xì)胞
P388.D1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKHEP1細(xì)胞、BT 549細(xì)胞、U-87MG ATCC細(xì)胞
KASUMI1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：9L細(xì)胞、Tca-8113細(xì)胞、NCI-H295R細(xì)胞
RCC-10RGB細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Caco-2細(xì)胞、HCC0038細(xì)胞、NHLF細(xì)胞
CALU 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM00637I細(xì)胞、NCI H226細(xì)胞、Hs 695.T細(xì)胞
RPMI 8226細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LLC1細(xì)胞、A204細(xì)胞、Intestinal Epithelioid細(xì)胞： No. 18細(xì)胞
MDA MB 231細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：L5178Y-R細(xì)胞、MX1細(xì)胞、E.G7-OVA細(xì)胞
LN-229細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RGCs細(xì)胞、786-0細(xì)胞、hSCC-25細(xì)胞
C2-C12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：AQ-Mel細(xì)胞、WEHI3細(xì)胞、KYSE-450細(xì)胞
Human Microvascular Endothelial細(xì)胞：-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Transformed C3H Mouse Kidney-1細(xì)胞、201T細(xì)胞、Hs695T細(xì)胞
Hs 822.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-N-MC細(xì)胞、CV 1細(xì)胞、GCT0404細(xì)胞
mREC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKNBE(2c)細(xì)胞、16-HBE14o細(xì)胞、LLC-PK-1細(xì)胞
mREC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKNBE(2c)細(xì)胞、16-HBE14o細(xì)胞、LLC-PK-1細(xì)胞
MGHU3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MOLT.4細(xì)胞、WM-115細(xì)胞、NCIH1963細(xì)胞
Human Intestinal Epithelial Cell-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：QGY7701細(xì)胞、CNE-2細(xì)胞、PK (15)細(xì)胞
MOLM-13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI N87細(xì)胞、Sol8細(xì)胞、WEHI3B細(xì)胞
HS-445細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PC.3細(xì)胞、HLE-SRA-01/04細(xì)胞、University of Michigan-Urothelial Carcinoma-3細(xì)胞
ROS 17/28細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：A-427細(xì)胞、BpRcl細(xì)胞、Ly19細(xì)胞
NCIH3255細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EAhy 926細(xì)胞、A-375細(xì)胞、VK2 (E6/E7)細(xì)胞
LICR-LON-HN6-R細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：751細(xì)胞、VM-CUB-1細(xì)胞、IGR.OV1細(xì)胞
NCI-SNU-C2B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：X63-Ag8細(xì)胞、SUM 52細(xì)胞、GL261細(xì)胞
FL 62891細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HL60細(xì)胞、NCI-SNU-216細(xì)胞、KPL-1細(xì)胞
HuCCT-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：T-98細(xì)胞、AR-42J細(xì)胞、RPMI1788細(xì)胞
SUM 52細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA415細(xì)胞、SU86-86細(xì)胞、SKRC-20細(xì)胞
NCI-H69C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK.MEL.28細(xì)胞、KNS42細(xì)胞、HEK;293細(xì)胞
NCI-H2291細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H1299細(xì)胞、OCI-LY-19細(xì)胞、H1435細(xì)胞
PTK 2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：COLO 699細(xì)胞、WEHI 3B細(xì)胞、SNU-638細(xì)胞
8305-C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CDC/EU.HMEC-1細(xì)胞、NCIH2452細(xì)胞、HTR8svn細(xì)胞
H716細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Colo16細(xì)胞、NOZAWA細(xì)胞、WI 38細(xì)胞
MGECs細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH28細(xì)胞、NCIH1755細(xì)胞、DC 2.4細(xì)胞
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