"K7M2-WT Adherent小鼠骨肉瘤成骨細胞系
細胞背景資料：骨肉瘤；肺轉(zhuǎn)移；雌性；BALB/c
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
正確的細胞復蘇需知事項：細胞凍存好了，接下來要注意什么問題呢？沒錯，就是記得到時間了，拿出來復蘇。那么，細胞復蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢？細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在？活力檢查——千萬不要使用不健康的細胞，可能有污染(真菌、支原體等)，如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細胞：補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細胞長至７０%單層時收獲細胞，計數(shù)活細胞數(shù)，用凍存液調(diào)整細胞密度~５ x１０６ Cell s/ml (根據(jù)不同的細胞類型調(diào)整)；凍存液——用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞，有不同類型的凍存液，根據(jù)細胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有)：５-１０% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì)；５-１５%甘油；如果細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長，應在５０%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長２４小時)內(nèi)凍存和復蘇。在凍存管上標記好細胞類型，日期，凍存人等信息，并保證每凍存管不超過１.５ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi)，因此，此步驟使用干冰，或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意，在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息，做好記錄是非常非常重要的！還有一個最重要的，一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細胞，以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題！細胞正確的復蘇方式和正確的凍存方式同樣重要，熟記以下要點：當從液氮罐內(nèi)取出細胞時，有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況，使用保護面罩和防護服十分必要；其實，細胞復蘇只是一個簡單的實驗，不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié)，不然，也不一定會盡如人意。例如說，人身健康方面：一定要記得做好防凍工作，戴上護目鏡；盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
K7M2-WT Adherent小鼠骨肉瘤成骨細胞系
細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
最近在培養(yǎng)細胞時，發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好，很容易扎堆生長，用胰酶消化的時候也是一團一團地被消化下來，很難把它們吹散成一個一個細胞。而且長得也挺快也挺不均勻的，傳代的第二天，有些地方就長得滿滿的了。想請教一下這是為什么呢？你好，我養(yǎng)的細胞和你一樣，消化下來也是一團的，但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻，分皿后在鏡下看一看，移動培養(yǎng)皿的時候盡量動作輕，避免晃動。細胞生長挺快，那么細胞的增殖能力應該較強。胰酶消化成團的問題我覺得有以下幾種可能：一、細胞消化后吹打不均勻，造成細胞成團生長：二、細胞細化太過，細胞成片脫落，吹打時沒有受力點，細胞聚團生長。解決辦法：根據(jù)細胞生長的情況進行多次消化，將同次消化下來的細胞放在一個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。貼壁細胞傳代培養(yǎng)：一般步驟為：真空泵吸走培養(yǎng)基，１XPBS漂洗兩次，加入１mlEDTA-Tripsin（１００mm皿為例），３７度放置數(shù)分鐘，輕拍培養(yǎng)瓶使細胞自瓶壁脫落，加入適量血清，以吸管上下吸放數(shù)次以打散細胞團塊，離心后加入新鮮培養(yǎng)基，按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細胞的傳代最重要的是胰酶處理時間，若胰酶處理太久，容易造成細胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強，嚴重的時候甚至會造成細胞死亡。我談談個人經(jīng)驗：HepG-２、A５４９、Hela、SGC-７９０１幾種癌細胞處理時間可適當放長，一般處理５-６min，C２C１２、COS-７、NIH-３T３比較容易脫落，２min足矣，P１９Cl６和２９３細胞貼壁不緊，可在PBS漂洗后，直接換新鮮培養(yǎng)基打散。
Tb1.Lu細胞系相關產(chǎn)品：CPA47細胞、H-1869細胞、L363細胞
SNU878細胞系相關產(chǎn)品：L cell細胞、CMECs細胞、A-875細胞
Karpas 422細胞系相關產(chǎn)品：WC00059細胞、NS-1細胞、TC7細胞
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
ECC12細胞系相關產(chǎn)品：HEK-EBNA細胞、U-118 MG細胞、Tadarida brasiliensis 1 lung細胞
C-33A細胞系相關產(chǎn)品：NCIH740細胞、CEM-T4細胞、PC3M-IE8細胞
JURKAT E-61細胞系相關產(chǎn)品：MT-4細胞、WM-2664細胞、HNEpC細胞
細胞生長特性：貼壁
K7M2-WT Adherent小鼠骨肉瘤成骨細胞系
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
常見細胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié)：１)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適？血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的含量多少會對細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為５%-１５%，不要低于５%或高過２０%，因為含量過低會導致細胞營養(yǎng)不足，過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為１０%，可以適量加減；２)何時須更換培養(yǎng)基？視細胞生長密度而定，或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間，按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進行更換；３)購買的復蘇細胞，為何會有脫落？因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩，收到后可以離心收集；４)購買的細胞冷凍管經(jīng)解凍后，為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形？研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少，大都是因為離心過程操作上的失誤，造成細胞的物理性損傷，以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心，應待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可；５)購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因？研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–８０°C太久；６)收到的冷凍管瓶身破裂，瓶蓋有裂紋，或瓶蓋脫落之原因？冷凍管瓶蓋裂紋，或瓶身破裂，可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當，造成冷凍管裂損，建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫，乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象，冷凍管有可能因此而造成細胞污染，故冷凍管于放入和取出液氮桶時，均應立刻將冷凍管再一次扭緊。
UMNSAH/DF-1細胞系相關產(chǎn)品：NCM-460細胞、NCIH1666細胞、H-1993細胞
BALL1細胞系相關產(chǎn)品：Wien 133細胞、HEH2細胞、UCLA-SO-M21細胞
HCC0095細胞系相關產(chǎn)品：Ha Fe細胞、L-1210細胞、VMRCLCD細胞
Molm 14細胞系相關產(chǎn)品：M-O7e細胞、HCO細胞、38C-13細胞
SCL-II細胞系相關產(chǎn)品：C41細胞、LL/2(LLc1)細胞、CCFSTTG1細胞
Calu3細胞系相關產(chǎn)品：PY8119細胞、CV1細胞、TM3細胞
KYSE-30細胞系相關產(chǎn)品：95-D細胞、NCTC929細胞、3T3 L1細胞
KYSE-180細胞系相關產(chǎn)品：SUM190細胞、PC-2 [Human pancreatic carcinoma]細胞、SKNBE(1)細胞
OLN 93細胞系相關產(chǎn)品：Co320細胞、NCI-H2452細胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-16細胞
MIN6細胞系相關產(chǎn)品：NCIH1568細胞、10RGB細胞、LS 123細胞
J 111細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H2030細胞、MRMT-1細胞、L929細胞
CCD-33Co細胞系相關產(chǎn)品：HMC細胞、SKNEP-1細胞、SBC3細胞
Clone Y-1細胞系相關產(chǎn)品：C-Lu65細胞、H1666_DA細胞、CCLP1細胞
K7M2-WT Adherent小鼠骨肉瘤成骨細胞系
CHO-ori細胞系相關產(chǎn)品：FL 62891細胞、X63-Ag 8.6.5.3細胞、HCASMC細胞
HNE3細胞系相關產(chǎn)品：GM04678細胞、KYSE-410細胞、LM-TK-細胞
SK-N-BE(1)n細胞系相關產(chǎn)品：NSC34細胞、H-2023細胞、EAHY-926細胞
SK-N-BE(1)n細胞系相關產(chǎn)品：NSC34細胞、H-2023細胞、EAHY-926細胞
TE 354.T細胞系相關產(chǎn)品：NFHIOSE-80細胞、EB-1細胞、RPMI 7951細胞
OCI-Ly07細胞系相關產(chǎn)品：MDA-175細胞、Nthy-ori 3-1細胞、U118MG細胞
NCIH2085細胞系相關產(chǎn)品：Hs840T細胞、Mino細胞、IEC6細胞
L5178Y細胞系相關產(chǎn)品：Transformed Human Liver Epithelial-3細胞、J774.A1細胞、PL-5細胞
H1781細胞系相關產(chǎn)品：MAC1細胞、mREC細胞、HEC151細胞
751細胞系相關產(chǎn)品：SK-NEP-1細胞、H-1792細胞、RIN-14B細胞
PL5細胞系相關產(chǎn)品：PSN-1細胞、JM-Jurkat細胞、SK-N-FI細胞
HOP 62細胞系相關產(chǎn)品：SNU886細胞、NCI-SNU-16細胞、H-1105細胞
MDCKII細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H774細胞、EoL-1-cell細胞、HCE細胞
PF382細胞系相關產(chǎn)品：FRTL-5 Cl 2細胞、RWPE1細胞、PC 61 5.3細胞
GM07404D細胞系相關產(chǎn)品：H1838細胞、NS20Y細胞、KP2細胞
RINm-5F細胞系相關產(chǎn)品：Capan-2細胞、NCIH1781細胞、hs 68細胞
MPP 89細胞系相關產(chǎn)品：KY180細胞、Sp 2/0-Ag 14細胞、INS1細胞
NCI-H23細胞系相關產(chǎn)品：HEL-92細胞、H676細胞、VSMC細胞
CFPAC細胞系相關產(chǎn)品：NCIH524細胞、HEL9217細胞、DMS-153細胞
CMT167細胞系相關產(chǎn)品：NS1/1-Ag4.1細胞、LIM-1215細胞、MC/CAR細胞
BT-B細胞系相關產(chǎn)品：HET1A細胞、Eph4 1424細胞、G-292 clone A141B1細胞
H-520細胞系相關產(chǎn)品：QGP-1細胞、UPCI-SCC090細胞、CPAE細胞
NRK-52E細胞系相關產(chǎn)品：Wistar Institute, Susan Hayflick細胞、Mia PACA 2細胞、PC9細胞
Colon26細胞系相關產(chǎn)品：ABE8.1/2細胞、TE 85.T細胞、BCECs細胞
CCLP1細胞系相關產(chǎn)品：HS0578T細胞、P3X63-Ag8.653細胞、F442-A細胞
CCRF-CEM C1細胞系相關產(chǎn)品：HIMEC細胞、FaDu細胞、HCT-GEO細胞
TE 354.T細胞系相關產(chǎn)品：NFHIOSE-80細胞、EB-1細胞、RPMI 7951細胞
P-815細胞系相關產(chǎn)品：P3-X63-Ag8細胞、Human fetal lung fibroblast 1細胞、Panc-327細胞
Calu6細胞系相關產(chǎn)品：Ra #1細胞、RPMI8402細胞、HEK-A細胞
MDBK (NBL-1)細胞系相關產(chǎn)品：H378細胞、RIN-m細胞、COR-L23/P細胞
A7r5細胞系相關產(chǎn)品：SKCol1細胞、HuH6細胞、NCI-H64細胞
H-446細胞系相關產(chǎn)品：U251-MG細胞、Hs 888.T細胞、A9(Hamprecht)細胞
769-P細胞系相關產(chǎn)品：143B細胞、MA 104細胞、RBE細胞
H1693細胞系相關產(chǎn)品：PC-14細胞、QGY7703細胞、NE1-E6E7細胞
H4-IIE-C3細胞系相關產(chǎn)品：CAL 27細胞、Human Embryonic Kidney 293細胞、Walker-Ca.256細胞
OCI-Ly 8細胞系相關產(chǎn)品：K562/ADP細胞、MOLT3細胞、MDA-MB-436細胞
L-Wnt3A細胞系相關產(chǎn)品：Hk-2細胞、Hs1.Tes細胞、MUGCHOR1細胞
NCCIT細胞系相關產(chǎn)品：L-929細胞、Ca Ski細胞、NPC-TW01細胞
Pt K2 (NBL-5)細胞系相關產(chǎn)品：NP69SV40T細胞、Cor L88細胞、NCIH1650細胞
Nb 2細胞系相關產(chǎn)品：3T3F442A細胞、A-549細胞、G401細胞
WM 239細胞系相關產(chǎn)品：PAEC細胞、DLD-1細胞、HCT8細胞
Biologics Standards-Cercopithecus-1細胞系相關產(chǎn)品：H-810細胞、KAT-5細胞、MB39細胞
K7M2-WT Adherent小鼠骨肉瘤成骨細胞系
SK-MEL-2-LUC細胞系相關產(chǎn)品：VE細胞、CORL105細胞、B16-F10細胞
EC-109細胞系相關產(chǎn)品：HRIF細胞、P3-X63Ag8.653細胞、SUDHL-1細胞
A-375SM細胞系相關產(chǎn)品：HCa/16A3-F細胞、NCIH1355細胞、NR8383細胞
RPTEC/TERT1細胞系相關產(chǎn)品：PTK-2細胞、H1819細胞、NT2細胞
SKNBE(2c)細胞系相關產(chǎn)品：Melan-a細胞、HCA 7細胞、NCI-H522細胞
SUPT-1細胞系相關產(chǎn)品：RIN14B細胞、Hs852T細胞、Cates 1B細胞
MC-3T3細胞系相關產(chǎn)品：CESS細胞、A-172MG細胞、RFL 6細胞
WM115mel細胞系相關產(chǎn)品：Panc203細胞、HTori-3.1細胞、UCLA RO-81A-1細胞
CFSC-8B細胞系相關產(chǎn)品：L-6 myoblast細胞、HCAEC細胞、M20 [Human melanoma]細胞
PC-3M細胞系相關產(chǎn)品：Murine Lung Epithelial-12細胞、Hs706T細胞、PA317細胞
HCT-8/V細胞系相關產(chǎn)品：DR2R 1610細胞、STTG1細胞、HuTu-80細胞
HCC0078細胞系相關產(chǎn)品：HT144細胞、MIA Paca2細胞、H-35細胞
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