"Ku812 Lymphoblastoid cells人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 細(xì)胞株(系)的使用,為醫(yī)學(xué)研究和測試工作帶來了極大的方便。但細(xì)胞的傳代是有限制的,長期連續(xù)傳代的細(xì)胞,不僅消耗大量的人力和物力,而且細(xì)胞的生長與形態(tài)等會有一定退變或轉(zhuǎn)化,因而細(xì)胞失去原有的遺傳特性,有時還會由于細(xì)胞污染而造成傳代中斷,種子丟失。因此,在實際工作中常需凍存一定數(shù)量的細(xì)胞,以備替換使用。細(xì)胞冷凍與復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng) 室的常規(guī)工作和通用技術(shù)。目前,細(xì)胞凍存最常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,主要采用加適量保護(hù)劑的緩慢冷凍法凍存細(xì)胞。細(xì)胞在不加任何保護(hù)劑的情況下直接冷凍,細(xì)胞內(nèi)外的水分會很快形成冰晶,從而引起一系列不良反應(yīng)。如細(xì)胞脫水使局部電解質(zhì)濃度增高,pH值改變,部分蛋白質(zhì)由于上述原因而變性,引起細(xì)胞內(nèi)部空間結(jié)構(gòu)紊亂,溶酶體膜由此遭到損傷而釋放出溶酶體酶,使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)成分造成破壞,線粒體腫脹,功能丟失,并造成能量代謝障礙。胞膜上的類脂蛋白復(fù)合體也易破壞引起細(xì)胞膜通透性的改變,使細(xì)胞內(nèi)容物丟失。如果細(xì)胞內(nèi)冰晶形成較多,隨冷凍溫度的降低,冰晶體積膨脹造成細(xì)胞核DNA空間構(gòu)型發(fā)生不可逆的損傷,而致細(xì)胞死亡。因此,細(xì)胞冷凍技術(shù)的關(guān)鍵是盡可能地減少細(xì)胞內(nèi)水分,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成。采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)分子量小,溶解度大,易穿透細(xì)胞,可以使冰點下降,提高細(xì)胞膜對水的通透性,且對細(xì)胞無明顯毒性。慢速冷凍方法又可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少胞內(nèi)形成冰結(jié)晶的機(jī)會,從而減少冰晶對細(xì)胞的損傷。 NCI-H1341細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-407細(xì)胞、Case 3細(xì)胞、Dysplastic Oral Keratinocyte細(xì)胞 253J細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM3569細(xì)胞、Mouse Podocyte Clone-5細(xì)胞、RT4P細(xì)胞 NCI-H929細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:S3-HeLa細(xì)胞、Glioma 261細(xì)胞、NCI-H865細(xì)胞 細(xì)胞生長:懸浮 Ku812 Lymphoblastoid cells人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的經(jīng)驗分享:支原體是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細(xì)胞,也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細(xì)胞培養(yǎng)中生長,營養(yǎng)要求比細(xì)菌高。細(xì)胞培養(yǎng)(特別是傳代細(xì)胞)被支原體污染是個世界性問題。在細(xì)胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%,支原體感染發(fā)生后能改變細(xì)胞的DNA,RNA及蛋白表達(dá),又不能通過可視法對其進(jìn)行檢測,而且它對細(xì)胞的生長率影響較小,不易引起注意。國內(nèi)外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見的污染細(xì)胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細(xì)胞的支原體種類是很多的,國外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細(xì)胞,有的細(xì)胞株可以同時污染兩種以上的支原體。支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染。組織細(xì)胞培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個方面來預(yù)防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴(yán)格實驗操作;細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌;在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細(xì)胞后,特別是重要的細(xì)胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補(bǔ)體聯(lián)合處理。支原體最突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細(xì)胞壁,一般來講,對作用于細(xì)胞壁生物合成的抗生素,如萬古霉素等完全不敏感;對多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些喹諾酮;其他類抗生素如基糖苷類、霉素對支原體有較小抑制作用,所以常不用來作為支原體感染的化學(xué)治療劑。 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代。3天內(nèi)可長滿 LMH細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SAOS 2細(xì)胞、Madin-Darby Canine Kidney細(xì)胞、NCI-H920細(xì)胞 C3H10T1/2CL8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNFI細(xì)胞、TE-15細(xì)胞、H-2073細(xì)胞 KBM-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BPH-1細(xì)胞、University of Michigan-Urothelial Carcinoma-1細(xì)胞、Oregon J-111細(xì)胞 AML193細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH146細(xì)胞、MOLP2細(xì)胞、GM01232E細(xì)胞 P-388D1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OV1063細(xì)胞、L-Wnt3A細(xì)胞、Neuro 2a細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 Ku812 Lymphoblastoid cells人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:懸浮生長 細(xì)胞形態(tài)特性:骨髓母細(xì)胞 購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,原因比較復(fù)雜,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳;血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳;解凍過程錯誤;冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心;懸渾細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞;培養(yǎng)溫度使用錯誤;細(xì)胞置于-80℃太久等。建議嚴(yán)格參照ATCC的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇、凍存等工作。欲將一般動物細(xì)胞離心下來,其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速?欲回收動物細(xì)胞,其離心速率一般為300×g(約1O(jiān)OOrpm),5-10分鐘,轉(zhuǎn)速過高或離心時間過長都將造成細(xì)胞死亡。合適的離心轉(zhuǎn)速是根據(jù)相對離心力決定。RCF=1.119×105×r×(rpm)2,其中r為離心機(jī)轉(zhuǎn)軸中心與離心套管底部內(nèi)壁的距離;rpm為離心機(jī)每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù);RCF(relative centrifugal force)為相對離心力,以重力加速度g(980.66cm/s2)的倍數(shù)來表示單位。 GM04671細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HONE-1細(xì)胞、Karpas-299細(xì)胞、H735細(xì)胞 BC3H-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:769P細(xì)胞、ETCC007細(xì)胞、GEO細(xì)胞 SGC7901細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Daoy細(xì)胞、Tokyo Medical and Dental university 8細(xì)胞、MDA-415細(xì)胞 U-CH1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL33細(xì)胞、Rin-M-5F細(xì)胞、CT26WT細(xì)胞 Statens Seruminstitut Rabbit Cornea細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUDHL4細(xì)胞、HT細(xì)胞、HCEC-B4G12細(xì)胞 T241細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JeKo 1細(xì)胞、VMCUB1細(xì)胞、MRC5細(xì)胞 Hep G2/C3A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HeLa-229細(xì)胞、GM05887細(xì)胞、SK-MEL28細(xì)胞 F56 [Human neoplasm]細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CL-11細(xì)胞、PANC-02-03細(xì)胞、TE-85 clone 5細(xì)胞 Be Wo細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDAMB330細(xì)胞、LNCaP C4-2B細(xì)胞、IMR-32細(xì)胞 SKUT1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tn5 B1-4細(xì)胞、Calf Pulmonary Artery Endothelial細(xì)胞、HepG2細(xì)胞 Ku812 Lymphoblastoid cells人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞系 HCA-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VP267細(xì)胞、Hep G2-Luc細(xì)胞、PBL細(xì)胞 WM-2664細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mahlavu細(xì)胞、SNUC2B細(xì)胞、MDCK supertube細(xì)胞 Hs 742.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:High5細(xì)胞、H-1435細(xì)胞、B16 subline B78細(xì)胞 Ly3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H295R細(xì)胞、MDA-MB-330細(xì)胞、LLC-WRC 256細(xì)胞 MHCCLM3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC0095細(xì)胞、H2110細(xì)胞、SNU-719細(xì)胞 Hs675T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A2780/CP70細(xì)胞、Tu-177細(xì)胞、624 MEL細(xì)胞 Hs675T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A2780/CP70細(xì)胞、Tu-177細(xì)胞、624 MEL細(xì)胞 CX-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MIA-Pa-Ca-2細(xì)胞、BV-2細(xì)胞、GM03320細(xì)胞 MD Anderson-Metastatic Breast-436細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GLRK 13細(xì)胞、EJ1細(xì)胞、HTR-8/SVneo細(xì)胞 Sup T-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NTERA-2 cl.D1細(xì)胞、MC116細(xì)胞、SK-MEL-MeWo細(xì)胞 ZR7530細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Caco2-BBE細(xì)胞、293-F細(xì)胞、H-1092細(xì)胞 EB2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CX1細(xì)胞、786O細(xì)胞、NCIH524細(xì)胞 EBNA293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC-I細(xì)胞、OV-1063細(xì)胞、MiaPaCa2細(xì)胞 HL-60細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc-813細(xì)胞、CX-1細(xì)胞、KNS62細(xì)胞 LLC-PK1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TR146細(xì)胞、RBE4細(xì)胞、A549/ATCC細(xì)胞 BALL-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HepG2細(xì)胞、SACC-LM細(xì)胞、LCLC-103H細(xì)胞 Michigan Cancer Foundation-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM-239細(xì)胞、Hs 888Lu細(xì)胞、SW-13細(xì)胞 PFSK1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DC 2.4細(xì)胞、Hs-274-T細(xì)胞、TK 10細(xì)胞 NCI H747細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NKL細(xì)胞、HeLa-S3細(xì)胞、Colon 26細(xì)胞 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