"LAD 2 epithelioid cells人肥大細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:肥大細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞株(系)的使用,為醫(yī)學(xué)研究和測試工作帶來了極大的方便。但細(xì)胞的傳代是有限制的,長期連續(xù)傳代的細(xì)胞,不僅消耗大量的人力和物力,而且細(xì)胞的生長與形態(tài)等會有一定退變或轉(zhuǎn)化,因而細(xì)胞失去原有的遺傳特性,有時還會由于細(xì)胞污染而造成傳代中斷,種子丟失。因此,在實際工作中常需凍存一定數(shù)量的細(xì)胞,以備替換使用。細(xì)胞冷凍與復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng) 室的常規(guī)工作和通用技術(shù)。目前,細(xì)胞凍存最常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,主要采用加適量保護劑的緩慢冷凍法凍存細(xì)胞。細(xì)胞在不加任何保護劑的情況下直接冷凍,細(xì)胞內(nèi)外的水分會很快形成冰晶,從而引起一系列不良反應(yīng)。如細(xì)胞脫水使局部電解質(zhì)濃度增高,pH值改變,部分蛋白質(zhì)由于上述原因而變性,引起細(xì)胞內(nèi)部空間結(jié)構(gòu)紊亂,溶酶體膜由此遭到損傷而釋放出溶酶體酶,使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)成分造成破壞,線粒體腫脹,功能丟失,并造成能量代謝障礙。胞膜上的類脂蛋白復(fù)合體也易破壞引起細(xì)胞膜通透性的改變,使細(xì)胞內(nèi)容物丟失。如果細(xì)胞內(nèi)冰晶形成較多,隨冷凍溫度的降低,冰晶體積膨脹造成細(xì)胞核DNA空間構(gòu)型發(fā)生不可逆的損傷,而致細(xì)胞死亡。因此,細(xì)胞冷凍技術(shù)的關(guān)鍵是盡可能地減少細(xì)胞內(nèi)水分,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成。采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質(zhì)分子量小,溶解度大,易穿透細(xì)胞,可以使冰點下降,提高細(xì)胞膜對水的通透性,且對細(xì)胞無明顯毒性。慢速冷凍方法又可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少胞內(nèi)形成冰結(jié)晶的機會,從而減少冰晶對細(xì)胞的損傷。 H1993細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Calu-1細(xì)胞、U20-S細(xì)胞、Centre Antoine Lacassagne-39細(xì)胞 SCC-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1048細(xì)胞、TE7細(xì)胞、SUM-149PT細(xì)胞 NCI-H345細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MOVAS-1細(xì)胞、MAC1細(xì)胞、K-1735細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 LAD 2 epithelioid cells人肥大細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細(xì)胞時,發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長,用胰酶消化的時候也是一團一團地被消化下來,很難把它們吹散成一個一個細(xì)胞。而且長得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長得滿滿的了。想請教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細(xì)胞和你一樣,消化下來也是一團的,但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動培養(yǎng)皿的時候盡量動作輕,避免晃動。細(xì)胞生長挺快,那么細(xì)胞的增殖能力應(yīng)該較強。胰酶消化成團的問題我覺得有以下幾種可能:一、細(xì)胞消化后吹打不均勻,造成細(xì)胞成團生長:二、細(xì)胞細(xì)化太過,細(xì)胞成片脫落,吹打時沒有受力點,細(xì)胞聚團生長。解決辦法:根據(jù)細(xì)胞生長的情況進行多次消化,將同次消化下來的細(xì)胞放在一個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時間,若胰酶處理太久,容易造成細(xì)胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強,嚴(yán)重的時候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。我談?wù)剛€人經(jīng)驗:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時間可適當(dāng)放長,一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 HCS-2/8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:293 c18細(xì)胞、PVEC細(xì)胞、GM03570細(xì)胞 VMRCLCD細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-5178-Y-R細(xì)胞、PaTu-8988s細(xì)胞、Astrocyte type I clone細(xì)胞 TFK1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ID8細(xì)胞、H520細(xì)胞、HCC1143細(xì)胞 AC29細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC-1-B細(xì)胞、H8細(xì)胞、GM3190細(xì)胞 HT 115細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SBC5細(xì)胞、H2171細(xì)胞、KYSE520細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 LAD 2 epithelioid cells人肥大細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:懸浮 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,原因比較復(fù)雜,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳;血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳;解凍過程錯誤;冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心;懸渾細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞;培養(yǎng)溫度使用錯誤;細(xì)胞置于-80℃太久等。建議嚴(yán)格參照ATCC的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進行細(xì)胞復(fù)蘇、凍存等工作。欲將一般動物細(xì)胞離心下來,其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速?欲回收動物細(xì)胞,其離心速率一般為300×g(約1O(jiān)OOrpm),5-10分鐘,轉(zhuǎn)速過高或離心時間過長都將造成細(xì)胞死亡。合適的離心轉(zhuǎn)速是根據(jù)相對離心力決定。RCF=1.119×105×r×(rpm)2,其中r為離心機轉(zhuǎn)軸中心與離心套管底部內(nèi)壁的距離;rpm為離心機每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù);RCF(relative centrifugal force)為相對離心力,以重力加速度g(980.66cm/s2)的倍數(shù)來表示單位。 MHCC 97-L細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CT-26 WT細(xì)胞、U-2OS細(xì)胞、Colon38細(xì)胞 Intestinal Porcine Epithelial Cell line-J2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B10BR細(xì)胞、C-33A細(xì)胞、HuH 6細(xì)胞 Biologics Standards-Cercopithecus-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-810細(xì)胞、KAT-5細(xì)胞、MB39細(xì)胞 Chinese Hamster Ovary細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs934T細(xì)胞、SKBR-3細(xì)胞、MGC-803細(xì)胞 PK15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM 2664細(xì)胞、HEC151細(xì)胞、Mel RM細(xì)胞 Emory University-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI747細(xì)胞、CHP100細(xì)胞、Capan-2細(xì)胞 NCIH1184細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AU-565細(xì)胞、H498細(xì)胞、H-847細(xì)胞 SIRC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:YD-15細(xì)胞、RPE-hTERT細(xì)胞、NIH 3T3細(xì)胞 H-1993細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc02細(xì)胞、Wistar Institute, Susan Hayflick細(xì)胞、293A細(xì)胞 N1E115細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ST-2細(xì)胞、Calu-6細(xì)胞、Kit225 K6細(xì)胞 LAD 2 epithelioid cells人肥大細(xì)胞系 H-345細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:V79細(xì)胞、X63.Ag8.653細(xì)胞、MDA-PCa-2b細(xì)胞 hTERT-HME1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-673細(xì)胞、COLO 320 HSR細(xì)胞、NL-20細(xì)胞 769-P細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:143B細(xì)胞、MA 104細(xì)胞、RBE細(xì)胞 NCI-SNU-668細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16-BL6細(xì)胞、PATU-S細(xì)胞、L2細(xì)胞 MEG01細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR4細(xì)胞、Hs706T細(xì)胞、Murine Long bone Osteocyte-Y4細(xì)胞 Hamster Islet Transformed-Tioguanine resistant clone 15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs729T細(xì)胞、BMU-S1細(xì)胞、Rca-B細(xì)胞 Hamster Islet Transformed-Tioguanine resistant clone 15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs729T細(xì)胞、BMU-S1細(xì)胞、Rca-B細(xì)胞 SCC-15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MKN 28細(xì)胞、SK-MEL-1細(xì)胞、OB2細(xì)胞 Nb 2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T3F442A細(xì)胞、A-549細(xì)胞、G401細(xì)胞 COLO320-DM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuO9細(xì)胞、RBMEC細(xì)胞、Cloudman S91 melanoma clone M-3細(xì)胞 U138MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT3細(xì)胞、Y3.AG.1.2.3細(xì)胞、MSTO-211 H細(xì)胞 Statens Seruminstitut Rabbit Cornea細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUDHL4細(xì)胞、HT細(xì)胞、HCEC-B4G12細(xì)胞 HUVSMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1436細(xì)胞、H2081細(xì)胞、SKMEL-1細(xì)胞 MuM-2C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs688(A)T細(xì)胞、Calu6細(xì)胞、OV2008細(xì)胞 HEI193細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DLD1細(xì)胞、138MG細(xì)胞、UMNSAH/DF-1細(xì)胞 Nb 2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T3F442A細(xì)胞、A-549細(xì)胞、G401細(xì)胞 P3/X63-Ag8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MHCC 97細(xì)胞、MOVAS細(xì)胞、HCC-366細(xì)胞 L-132細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL851細(xì)胞、EVSA/T細(xì)胞、OCI/AML5細(xì)胞 Swiss 3T6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM02219D細(xì)胞、C3H/10T1/2-clone8細(xì)胞、KM-12細(xì)胞 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