人胸腎表達趨化因子(BRAK/CXCL14)elisa試劑盒優(yōu)雙抗體夾心法(檢測未知抗原);
1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
3、加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
人胸腎表達趨化因子（BRAK/CXCL14）ELISA試劑盒kit說明書注意事項：
◆實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
◆酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
◆建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
◆若顯色過淺，可適當延長底物溫育時。
◆標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應。保存過久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。
◆凍結標本溶解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛混合，不要在混勻器上強烈震蕩。
◆渾濁或有沉淀的標本應先離心或過濾，澄清后再檢測。
◆反復凍融會使蛋白效價降低，所以代測樣本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。