Ki67細(xì)胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)

中文名稱：Ki67細(xì)胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)

英文名稱：Ki67 cell proliferation Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格：20T

Ki67 蛋白是細(xì)胞周期相關(guān)的一種核蛋白，主要表達于細(xì)胞增殖分裂的各個時期（G1、S、G2 和M 期），但是在靜息的細(xì)胞（G0 期）中不表達。Ki67 常用于檢測腫瘤細(xì)胞的生長指數(shù)（免疫組化法利用計算細(xì)胞總數(shù)中的Ki67 陽性細(xì)胞數(shù)所占比例得到Ki67 指數(shù)）。

Ki67 通常通過標(biāo)記抗Ki67 的抗體（FITC 綠色熒光）和DNA 染料碘化丙啶（PI，紅色）而利用流式細(xì)胞儀檢測來實現(xiàn)對細(xì)胞周期的檢測。

操作方法
1. 在最適的環(huán)境下培養(yǎng)細(xì)胞。
2. 除去培養(yǎng)液，用PBS 洗一次。
3. 胰蛋白酶處理和收集細(xì)胞，離心，（注意1）保證每管細(xì)胞數(shù)在106 個。
4. 用0.3 ml PBS 輕輕的重懸細(xì)胞, 然后慢慢加入0.7 ml 預(yù)冷的100%乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混勻。在4°C 至少1h。（注意2）
5. 沉淀細(xì)胞，完全吸去上清。
6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗細(xì)胞2 次。
7. 用100μl 抗體孵育液（0.5% Tween-20/1%BSA/PBS）重懸細(xì)胞，加入1ul Ki67 抗體(1μg/106 cells)，室溫孵育1 小時。
8. 離心收集細(xì)胞，用150μl1% BSA-PBS 洗2 次。
9. 離心收集細(xì)胞，用50μl 抗體孵育液重懸，加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgG-FITC，室溫孵育30 分鐘。離心收集細(xì)胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。
10. 用含有終濃度為10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS（pH7.4）重懸細(xì)胞。
11. 避光使細(xì)胞在室溫下孵育20min 后，離心收集細(xì)胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后，轉(zhuǎn)移至流式檢測管中重懸。
12. FACS 檢測或者儲存于4℃。
 

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！