PCNA細(xì)胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)

中文名稱：PCNA細(xì)胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)

英文名稱：PCNA cell proliferation Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格：20T

PCNA 細(xì)胞增殖檢測試劑盒（細(xì)胞免疫熒光法/流式細(xì)胞儀檢測），PCNA是細(xì)胞DNA 多聚酶的“δ”輔助蛋白，是真核細(xì)胞DNA 合成時所必需的一種酸性核蛋白。PCNA 在細(xì)胞核內(nèi)合成，并儲存在核內(nèi)，細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)時，其含量很低，當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入增殖周期中，其表達(dá)明顯增加，故PCNA 的表達(dá)高低可反映細(xì)胞增殖的活躍程度。

操作方法
1. 在最適的環(huán)境下培養(yǎng)細(xì)胞。
2. 除去培養(yǎng)液，用PBS 洗一次。
3. 胰蛋白酶處理和收集細(xì)胞，離心，（注意1）保證每管細(xì)胞數(shù)在106 個。
4. 用0.3 ml PBS 輕輕的重懸細(xì)胞, 然后慢慢加入0.7 ml 預(yù)冷的100%乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混勻。在4°C 至少1h。（注意2）
5. 沉淀細(xì)胞，完全吸去上清。
6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗細(xì)胞2 次。
7. 用100μl 抗體孵育液（0.5% Tween-20/1%BSA/PBS）重懸細(xì)胞，加入1ul PCNA 抗體(1μg/106 cells)，室溫孵育1 小時。
8. 離心收集細(xì)胞，用150μl1% BSA-PBS 洗2 次。
9. 離心收集細(xì)胞，用50μl 抗體孵育液重懸，加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgG-FITC，室溫孵育30 分鐘。離心收集細(xì)胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。
10. 用含有終濃度為10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS（pH7.4）重懸細(xì)胞。
11. 避光使細(xì)胞在室溫下孵育20min 后，離心收集細(xì)胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后，轉(zhuǎn)移至流式檢測管中重懸。
12. FACS 檢測或者儲存于4℃。

注意事項
1.所有的沉淀細(xì)胞步驟為2,000 rpm, 5 min。
2.可滲透化處理細(xì)胞后細(xì)胞濃度大約為106 ，樣品可以4°C 儲存于乙醇中到2 個星期。
3.流式細(xì)胞檢測時需要設(shè)立對照試驗：
只用PI 染細(xì)胞
只用羊抗小鼠IgG-FITC 染細(xì)胞
未染色的細(xì)胞組
 

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！