"NCI-H211 epithelioid cells人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項:細(xì)胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細(xì)胞:補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細(xì)胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長至70%單層時收獲細(xì)胞,計數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點:當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時,有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護面罩和防護服十分必要;其實,細(xì)胞復(fù)蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細(xì)胞的損傷等等。 NCI-H1373細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HLMVEC細(xì)胞、Colon 38細(xì)胞、RIN Cl-5F細(xì)胞 SC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1105細(xì)胞、3AO細(xì)胞、RH30SJ細(xì)胞 RT4P細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hep 3B2細(xì)胞、DMS153細(xì)胞、FRhK-4細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 NCI-H211 epithelioid cells人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的經(jīng)驗分享:支原體是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細(xì)胞,也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細(xì)胞培養(yǎng)中生長,營養(yǎng)要求比細(xì)菌高。細(xì)胞培養(yǎng)(特別是傳代細(xì)胞)被支原體污染是個世界性問題。在細(xì)胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達到63%,支原體感染發(fā)生后能改變細(xì)胞的DNA,RNA及蛋白表達,又不能通過可視法對其進行檢測,而且它對細(xì)胞的生長率影響較小,不易引起注意。國內(nèi)外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見的污染細(xì)胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細(xì)胞的支原體種類是很多的,國外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細(xì)胞,有的細(xì)胞株可以同時污染兩種以上的支原體。支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染。組織細(xì)胞培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個方面來預(yù)防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴(yán)格實驗操作;細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌;在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細(xì)胞后,特別是重要的細(xì)胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯(lián)合處理。支原體最突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細(xì)胞壁,一般來講,對作用于細(xì)胞壁生物合成的抗生素,如萬古霉素等完全不敏感;對多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些喹諾酮;其他類抗生素如基糖苷類、霉素對支原體有較小抑制作用,所以常不用來作為支原體感染的化學(xué)治療劑。 細(xì)胞傳代方法:3-4天換液1次。 CaEs17細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:X63Ag8-653細(xì)胞、SU-DHL-4細(xì)胞、B16/BL6細(xì)胞 Colon 38細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKMEL-31細(xì)胞、Ls-174-T細(xì)胞、SkMel31細(xì)胞 NCI-H64細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HepaRG細(xì)胞、D-324 Med細(xì)胞、McA-RH7777細(xì)胞 TGW-nu細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNEP細(xì)胞、OCI Ly10細(xì)胞、TE-85細(xì)胞 OCM1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CTV-1細(xì)胞、hTERTHME1細(xì)胞、CL-11細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 NCI-H211 epithelioid cells人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:懸浮生長 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 常見細(xì)胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因為含量過低會導(dǎo)致細(xì)胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進行更換;3)購買的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會有脫落?因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 IR 983F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB-231 #4175細(xì)胞、Detroit-562細(xì)胞、HCT GEO細(xì)胞 UM-UC14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH510細(xì)胞、OVCAR 8細(xì)胞、Psi2-DAP細(xì)胞 IB-RS2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-1417細(xì)胞、MKN-45細(xì)胞、OUMS-23細(xì)胞 HuH1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H747細(xì)胞、Wien133細(xì)胞、AKR細(xì)胞 CT 26細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI/ADR-RES細(xì)胞、CMT 64細(xì)胞、GM-346細(xì)胞 SPC-A-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEM.C1細(xì)胞、BC-024細(xì)胞、751細(xì)胞 HEK 293FT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CBRH7919細(xì)胞、HBE細(xì)胞、IAR 20細(xì)胞 AK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Virginia Mason Research Center-Renal Cancer Z細(xì)胞、HGMC細(xì)胞、TE-13細(xì)胞 D283MED細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Lu99A細(xì)胞、HEK293S細(xì)胞、DoTc2細(xì)胞 QG56細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EVSA/T細(xì)胞、U-343MG細(xì)胞、Neuro2a細(xì)胞 NCI-H211 epithelioid cells人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系 D-283MED細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:293 Ad5細(xì)胞、KMS-18細(xì)胞、P3-NS1/1-Ag4-1細(xì)胞 Monomac-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2228細(xì)胞、Panc 10.05細(xì)胞、SUM190細(xì)胞 GES-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCET細(xì)胞、PC-14細(xì)胞、GI-1細(xì)胞 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