"G-402 epithelioid cells人腎平滑肌瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項(xiàng):細(xì)胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯(cuò),就是記得到時(shí)間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細(xì)胞:補(bǔ)充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞,計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時(shí))內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個(gè)最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個(gè)液氮罐出現(xiàn)問題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點(diǎn):當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時(shí),有可能會(huì)出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要;其實(shí),細(xì)胞復(fù)蘇只是一個(gè)簡單的實(shí)驗(yàn),不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會(huì)盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對(duì)細(xì)胞的損傷等等。 SK-N-BE(1)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AZ-521細(xì)胞、NOR-10細(xì)胞、RAMOS2G64C10細(xì)胞 U14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IFRS1細(xì)胞、DR2R 1610細(xì)胞、H-1838細(xì)胞 NCTC 3960細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MD Anderson-Metastatic Breast-157細(xì)胞、HOS/MNNG細(xì)胞、JAR細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 G-402 epithelioid cells人腎平滑肌瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 冷凍細(xì)胞解凍程序:依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單指定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它指定之成份和比例,制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類,若因?qū)嶒?yàn)需要,必須有所不同時(shí),務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成,確定細(xì)胞適應(yīng)后,方進(jìn)行所需之實(shí)驗(yàn)。FBS(fetal bovine serum,胚牛血清), CS(calf serum,小牛血清)和HS(horse serum,馬血清),對(duì)細(xì)胞而言差異極大,請務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單指定之血清種類培養(yǎng)之。將培養(yǎng)基置于37°C水槽中回溫,回溫后噴以70%酒精并擦拭之,移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。取出冷凍管,立即放入37°C水槽中快速解凍,水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿,否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化后,以70%ethanol擦拭冷凍管外部,移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。依據(jù)細(xì)胞種類和濃度,于無菌操作臺(tái)內(nèi)?。保癿l培養(yǎng)基加至T25或T75flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液,緩緩加入T25或T75flask內(nèi)之培養(yǎng)基,混合均勻,放入37°C,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。對(duì)絕大多數(shù)細(xì)胞而言,1%以下之冷凍保護(hù)劑DMSO,不會(huì)對(duì)細(xì)胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍細(xì)胞中去除,待第二天確定細(xì)胞生長或貼附良好后再去除即可。惟對(duì)極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會(huì)造成細(xì)胞分化之細(xì)胞,需立即去除DMSO者,則可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入5-10ml培養(yǎng)基中,離心300xg(約1000rpm),5分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養(yǎng)基,將細(xì)胞均勻混合后,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,再放入37°C,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:6傳代,每周2-3次。 UACC-893細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HGC27細(xì)胞、NCIH810細(xì)胞、NB19細(xì)胞 A9(Hamprecht)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCC-15細(xì)胞、HCC-1359細(xì)胞、PC-14細(xì)胞 NS-1-Ag4-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H661細(xì)胞、Tb1Lu細(xì)胞、OUMS27細(xì)胞 AQ-Mel細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM149PT細(xì)胞、NCI522細(xì)胞、Jurkat E6.1細(xì)胞 BEND細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SJ-Rh 30細(xì)胞、HBMEC細(xì)胞、MOLP-2細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 G-402 epithelioid cells人腎平滑肌瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁生長 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮細(xì)胞樣 常見細(xì)胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長會(huì)產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因?yàn)楹窟^低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞營養(yǎng)不足,過高則會(huì)破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換;3)購買的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會(huì)有脫落?因?yàn)檫\(yùn)輸?shù)倪^程中不可避免的會(huì)有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 Ramos-RA1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-740細(xì)胞、H2052_MM細(xì)胞、870細(xì)胞 VeroC1008細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Bronchial Epithelium transformed with Ad12-SV40 2B細(xì)胞、CEMO-1細(xì)胞、EST81細(xì)胞 AG06814-M細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:J774 A.1細(xì)胞、SNU-761細(xì)胞、Walker/LLC-WRC256細(xì)胞 BpRc1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:hTERT-HME1細(xì)胞、H1048細(xì)胞、IM-9細(xì)胞 H-87細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc813細(xì)胞、Karpas299細(xì)胞、ZR75-30細(xì)胞 SW-900細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HD11細(xì)胞、Hs68細(xì)胞、AMO1細(xì)胞 AZ 521細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A72細(xì)胞、H1651細(xì)胞、U-343-MG細(xì)胞 MFM-223細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKLU-1細(xì)胞、KM12-SM細(xì)胞、P3X63Ag8-6-5-3細(xì)胞 MG-HU-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-32細(xì)胞、CCD-1112sk細(xì)胞、LTEPa2細(xì)胞 C4-I細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BpRc1細(xì)胞、D-341 Med細(xì)胞、Hs 888.Lu細(xì)胞 G-402 epithelioid cells人腎平滑肌瘤細(xì)胞系 Detroit 562細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUDHL6細(xì)胞、PaTu 8988s細(xì)胞、Hs746T細(xì)胞 MOLT.4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H295細(xì)胞、A2780S細(xì)胞、DCS細(xì)胞 HGC-27細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FLS細(xì)胞、H510細(xì)胞、Roswell Park Memorial Institute 7951細(xì)胞 CNE1-LUC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE3A細(xì)胞、C643細(xì)胞、H-889細(xì)胞 TOV21細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1563細(xì)胞、MDA-231細(xì)胞、OCI-Ly18細(xì)胞 Fetal Human Colon細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM04154細(xì)胞、PBMC細(xì)胞、SR786細(xì)胞 HBEpiC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RWPE-2細(xì)胞、SKO3細(xì)胞、GM03571細(xì)胞 SW-48細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 16細(xì)胞、H-2030細(xì)胞、B16 F1細(xì)胞 MH7A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOK細(xì)胞、BHP-10細(xì)胞、H1793細(xì)胞 BL-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL62細(xì)胞、Hs729細(xì)胞、HemECs細(xì)胞 HCoEpiC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P36細(xì)胞、C8D1A細(xì)胞、HONE-1細(xì)胞 Panc 5.04細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WBF344細(xì)胞、CA-OV-3細(xì)胞、MESSA Dx5細(xì)胞 B6Tert-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEM-0細(xì)胞、EL4細(xì)胞、SNT8細(xì)胞 MDA-415細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HUVEC細(xì)胞、Mouse INsulinoma 6細(xì)胞、C22 (Clara)細(xì)胞 TOV21G細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-4細(xì)胞、PANC-1細(xì)胞、SNU398細(xì)胞 PG-4 (S+L-)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SB細(xì)胞、MCF7細(xì)胞、COC1/CDDP細(xì)胞 Lewis lung carcinoma細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Duck embryo細(xì)胞、293H細(xì)胞、WERI-Rb1細(xì)胞 OVCAR-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:R 1610細(xì)胞、Lieming Xu-2細(xì)胞、VSC4.1細(xì)胞 HEYA8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs675T細(xì)胞、SJRH30細(xì)胞、FET細(xì)胞 H69/P細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mo 59J細(xì)胞、SNU-1040細(xì)胞、HFT-8810細(xì)胞 CHL1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MBMEC細(xì)胞、NCI-H220細(xì)胞、MDA157細(xì)胞 NCIH1688細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H23細(xì)胞、AGS細(xì)胞、786-0WT細(xì)胞 HCFB(HCF)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WEHI-231細(xì)胞、MG63細(xì)胞、OVCAR 420細(xì)胞 MV4:11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P30OHK細(xì)胞、K1細(xì)胞、BXPC3細(xì)胞 B-16細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SU-86-86細(xì)胞、U-2 OS細(xì)胞、H1975細(xì)胞 HMO6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NG 108-15細(xì)胞、CNE2Z細(xì)胞、H-378細(xì)胞 EBC-1/original細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Caki-2細(xì)胞、ACC-3細(xì)胞、AN-3細(xì)胞 PANC 203細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE4細(xì)胞、WEHI-3細(xì)胞、L-WRN細(xì)胞 NCI-H1930細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TCC Sup細(xì)胞、Hs695細(xì)胞、NCI-H1793細(xì)胞 SKMEL3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H146細(xì)胞、NCI-ADR-RES細(xì)胞、COV434細(xì)胞 SMA560細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Kit 225 K6細(xì)胞、CEM/0細(xì)胞、PECAPJ34細(xì)胞 Hopkins-92細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKBr3細(xì)胞、H1650細(xì)胞、Panc 4.03細(xì)胞 HeLa-S3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hamster Islet Transformed-Tioguanine resistant clone 15細(xì)胞、P3-X63-Ag8細(xì)胞、SW 579細(xì)胞 LAN-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH460細(xì)胞、KMM1細(xì)胞、BTI-Tn5B14細(xì)胞 HUT-226細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCC23細(xì)胞、COLO-699細(xì)胞、OVCAR10細(xì)胞 GP5d細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKES-1細(xì)胞、OCI-AML2細(xì)胞、Vero細(xì)胞 NS-1-Ag4-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H661細(xì)胞、Tb1Lu細(xì)胞、OUMS27細(xì)胞 L Wnt-3A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HANK1細(xì)胞、FRO細(xì)胞、Ball 1細(xì)胞 Hs-274-T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GI-1細(xì)胞、HeLa S-3細(xì)胞、Pfeiffer細(xì)胞 IPEC-J2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NT2細(xì)胞、Det. 562細(xì)胞、ACC-M細(xì)胞 SKM-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HGMC細(xì)胞、GM00637H細(xì)胞、L cells細(xì)胞 B16/F10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc_05_04細(xì)胞、CAL 39細(xì)胞、HCC366細(xì)胞 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