"EOMA epithelioid cells小鼠血管內(nèi)皮瘤細胞系 細胞背景資料:詳見相關(guān)文獻介紹 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞復(fù)蘇后貼壁細胞較少的問題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細胞沒問題??偨Y(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細胞復(fù)蘇時失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當(dāng)會事。 MN60細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-679細胞、VMRCRCZ細胞、WISH細胞 HCC1954BL細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HA1800細胞、S-16細胞、LOU-NH-91細胞 EU-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FUOV1細胞、ZYM-DIEC02細胞、HEK-293F細胞 細胞生長:貼壁 EOMA epithelioid cells小鼠血管內(nèi)皮瘤細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 血清必須貯存于–20~-70℃,若存放于4℃,請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中,由于血清結(jié)凍時體積會增加約10%,必須預(yù)留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無菌,不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,勿直接過濾血清。瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室溫下全溶后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞,而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物:發(fā)生之原因有許多種,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成,這些凝絮沈淀物不會影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物,可用離心3000rpm,5min去除,或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物,因為會阻塞過濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點”:通常經(jīng)過熱處理之血清,沈淀物的形成會顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”,常會誤認為血清遭受污染,而將血清放在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物”,但在37℃環(huán)境下,又會使此沈淀物增多,更會誤認為微生物之增殖,但以培養(yǎng)細菌之培養(yǎng)基檢測,又沒有污染。一般而言,此小黑點應(yīng)不會影響細胞之生長,但若懷疑此血清之品質(zhì),應(yīng)立即停用,更換另一批號的血清。 細胞傳代方法:1:2傳代 MNNG/HOS Clone F-5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SJSA1細胞、DHL-16細胞、GM02131A細胞 ARPE-19細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CoCL3細胞、TMK-1細胞、MDA 1386細胞 CF-PAC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2452細胞、P30/Ohkubo細胞、NCC-IT細胞 Hs-343-T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FL83B細胞、RCK-8細胞、HCT FET細胞 LA 4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:T/G HA-VSMC細胞、Fao細胞、BC3H-1細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 EOMA epithelioid cells小鼠血管內(nèi)皮瘤細胞系 細胞生長特性:貼壁生長 細胞形態(tài)特性:上皮樣 細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復(fù)蘇好的細胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認當(dāng)?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應(yīng),造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 P-36細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCT_116細胞、Chinese Hamster Ovary細胞、VM-CUB-1細胞 MDA-MB-468-RED細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM346細胞、Medical Research Council cell strain-5細胞、Me Wo細胞 KBM5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KMM-1細胞、Virginia Mason Research Center-Renal Cancer Z細胞、NW38細胞 RPMI8226/S細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFL-1細胞、SMA-560細胞、BEL7404細胞 G361-mel細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KBM-5細胞、TK-1細胞、REC 1細胞 NPA 87細胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-6TG細胞、32Dcl3細胞、Swiss 3T3細胞 HCCC-9810細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ES2細胞、CAL-148細胞、MDA-MB-231細胞 HTR-8/SV neo細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BDCM細胞、RMa-bm細胞、NCI-H747細胞 130T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:L 132細胞、HuPT4細胞、F81細胞 MDA-MB-231-GFP細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EJ細胞、LuCL4細胞、BTI-Tn-5B1-4細胞 EOMA epithelioid cells小鼠血管內(nèi)皮瘤細胞系 DAN-G細胞系相關(guān)產(chǎn)品:aNK細胞、MC 3T3-E1細胞、Ramos-2G6-4C10細胞 P3JHR1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEMC7細胞、ECC-10細胞、JB6Cl30細胞 WM115細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NE1細胞、SN12PM6細胞、Jurkat FHCRC細胞 MC-26細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-1428細胞、C3A細胞、Hs 683細胞 MHCC97-H細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Homo sapiens No. 578, tumor cells細胞、RIN m5F細胞、MC3T3-E1(C4)細胞 HEK/EBNA細胞系相關(guān)產(chǎn)品:K 562細胞、HT3細胞、NCI-H1693細胞 HEK/EBNA細胞系相關(guān)產(chǎn)品:K 562細胞、HT3細胞、NCI-H1693細胞 50.B1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TOV21G細胞、WIL2 S細胞、SW579細胞 GM00637B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Neukoplast細胞、L-M(TK-)細胞、alphaTC1 Clone 6細胞 OPM-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NK-92MI細胞、OVCAR-420細胞、MSC細胞 HNE-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SP-2細胞、DMS 79細胞、NCI-SNU-119細胞 NCC-IT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2198細胞、MGHU1細胞、SUP-T1細胞 D341細胞系相關(guān)產(chǎn)品:hFOB1.19細胞、CAL-120細胞、KASUMI6細胞 Panc_02_03細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-LY-19細胞、HCC1954-BL細胞、KU1919細胞 SN12CPM6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SV40-HCEC細胞、COLO 320HSR細胞、Hs-274-T細胞 JB6 Cl 30細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MD Anderson-Metastatic Breast-435細胞、HEY-A8細胞、NCIH1184細胞 NCCIT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-929細胞、Ca Ski細胞、NPC-TW01細胞 Human Corneal Epithelial cells-Transformed細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1755細胞、NCI H69細胞、WEHI-3B細胞 SN-12C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BRL 3A細胞、KM.12細胞、MCF7細胞 Caco-2/BBe 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW620細胞、RA-FLSs細胞、SK HEP-1細胞 HFL-I細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tregs細胞、HT1376細胞、H-295細胞 Human Fetal Thymocyte-8810細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-1569細胞、H-69細胞、KATO III細胞 HUTU80細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-LMS-1細胞、IPECJ2細胞、PCI-SG231細胞 NPA87細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DU 145細胞、Sc-1細胞、SHEP1細胞 ssMCF7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mc Coy細胞、NCI-H2106細胞、BEL/FU細胞 EL-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NHDF細胞、16HBE14o-細胞、MHCC-97細胞 SK MES 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR.3細胞、D-283MED細胞、LNCaP C4-2細胞 Mel624細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH847細胞、CAL 148細胞、SK Mel 24細胞 SKMES1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MG63細胞、NU-GC-4細胞、SW-982細胞 LS 180細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT-1080細胞、MODE-K細胞、H-661細胞 NCIH2030細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DoHH-2細胞、RH-30細胞、GP2-293細胞 Case 3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2106細胞、BGC823細胞、H1666細胞 ACT-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LC-2-Ad細胞、SW1990細胞、H1688細胞 EAhy926細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs.27細胞、C-33 A細胞、NCI-322細胞 HSAS3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PE/CA-PJ-34細胞、Buffalo Rat Liver-3A細胞、HUTU80細胞 LN382細胞系相關(guān)產(chǎn)品:526mel細胞、PL5細胞、GC1-SPG細胞 NCI-H524細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DHL8細胞、IMR32細胞、UPCI-SCC090細胞 RCC4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KM933細胞、NCI-SNU-423細胞、HEK 293-F細胞 Factor Dependent Continuous-Paterson 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Capan-1細胞、HIT.T15細胞、MB 157細胞 CCD966SK細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE-150細胞、Hs821T細胞、YD38細胞 ECC 10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LC1-Sq細胞、HCC-2218細胞、HEEpiC細胞 SaOS-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A2058細胞、HO8910PM細胞、LNCaP-FGC細胞 INS1E細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC1B細胞、KTCTL140細胞、HEK 293T/17細胞 H28細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1618細胞、HOK細胞、V79-GalK1細胞 Hs832T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PA I細胞、SCL I細胞、mIMCD-3細胞 MDAMB157細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MRC-V細胞、H-596細胞、no-11細胞 CL MC/9細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFL 1細胞、Walker256-TC細胞、NOR-10細胞 UMRC-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RBL細胞、NCI-H740細胞、CMT-93細胞 SU86.86細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NT2D1細胞、BIC細胞、H-1435細胞 MuM-2B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MNNG細胞、KYSE 70細胞、CL34細胞 DU145細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RKN細胞、Mc Coy細胞、1.1B4細胞 EOMA epithelioid cells小鼠血管內(nèi)皮瘤細胞系 SW1271細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BT325細胞、P3X63 AG8-653細胞、3T3L1細胞 SNU-C1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NGP細胞、C1R細胞、SBC-3細胞 FHL-124細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-MEL3細胞、SNU5細胞、Monomac-1細胞 KBM-5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BPH-1細胞、TOV112細胞、Opossum Kidney細胞 "
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